1991 年度実績報告書

植物組織特異的な遺伝子発現機構解明のための試験管内転写系の開発

研究課題

研究課題/領域番号	03554027
研究機関	名古屋大学
研究代表者	山崎健一名古屋大学, 農学部, 助手 (40182480)
研究分担者	名取與平日清製粉株式会社, 第二研究所, 専門研究員山口淳二名古屋大学, 農学部, 助手 (10183120)
キーワード	植物 / 遺伝子発現機構 / 試験管内転写系 / インビトロ転写系 / 核抽出液 / RNAポリメラ-ゼ
研究概要	1.平成1年度の研究により実用可能な試験管内転写系の開発を完了した。CaMV35Sプロモ-タ-を挿入した超ラセンプラスミドDNAを転写鋳型として用いて小麦胚芽クロマチン抽出液中で転写を行なうと、プロモ-タ-の挿入に依存した正しい長さの転写物が観察された。この後、この転写鋳型のプロモ-タ-上流にシスエレメントを挿入したプラスミドと、そのシスエレメントに結合する転写因子との組合せにより、塩基配列特異的・転写因子特異的な試験管内転写系を完成した。 2.平成3年度の研究により新たに得られた知見。双子葉植物であるタバコの実生と根と葉より核を分離し、核抽出液を得た後、この抽出液中のRNAポリメラ-ゼII活性や、その阻害活性について検討したところ、まず根と葉からの核の回収が極めて悪いこと、核の抽出液に転写阻害活性が見られることが分かった。そこで、その前段階としてタバコ培養細胞であるBY2のプロトプラストを用いて核を調製したところ回収率は極めて良いことが分かった。 3.タバコ実生の根での特異的遺伝子発現を規定するシスエレメント-R(TGACGの直列繰り返し配列)を基本転写鋳型のプロモ-タ-の上流に挿入したプラスミドDNAを作成した。 4.2で得た核の抽出液をもちいて、3の転写鋳型を読ませたところ僅かではあるが、転写活性も見いだされた。

研究成果
(6件)

すべてその他

すべて文献書誌 (6件)

[文献書誌] 山崎健一: "Selective and accurate initiation of transcription at the T-DNA promoter in a soluble chromatin extract from wheat germ." Molecular & General Genetics. 209. 445-452 (1987)
[文献書誌] 山崎健一: "Accurate transcription of plant genes in vitro using a wheat germ-chromatin extract." Plant Molecular Biology Reporter. 8(2). 114-123 (1990)
[文献書誌] 山崎健一: "TGAla,a tobacco DNA-binding protein,increases the rate of initiation in a plant in vitro transcription system." Proceedings of Natinal Academie of Science. 87. 7035-7039 (1990)
[文献書誌] 片桐文章: "A Plant DNA-binding protein increases the number of active preinitiation complexes in a human in vitro transcription system." Genes & Developments. 4. 1899-1909 (1990)
[文献書誌] 山崎健一: "植物遺伝子のインビトロ転写法,植物細胞工学" 秀潤社, 88 (1990)
[文献書誌] 山崎健一: "試験管内転写系による植物転写因子の機能解析,植物全能性の分子生物学" 朝倉書店, 305 (1991)

1991 年度 実績報告書

植物組織特異的な遺伝子発現機構解明のための試験管内転写系の開発

研究代表者

山崎 健一 名古屋大学, 農学部, 助手 (40182480)

研究成果

[文献書誌] 山崎 健一: "Selective and accurate initiation of transcription at the T-DNA promoter in a soluble chromatin extract from wheat germ." Molecular & General Genetics. 209. 445-452 (1987)

[文献書誌] 山崎 健一: "Accurate transcription of plant genes in vitro using a wheat germ-chromatin extract." Plant Molecular Biology Reporter. 8(2). 114-123 (1990)

[文献書誌] 山崎 健一: "TGAla,a tobacco DNA-binding protein,increases the rate of initiation in a plant in vitro transcription system." Proceedings of Natinal Academie of Science. 87. 7035-7039 (1990)

[文献書誌] 片桐 文章: "A Plant DNA-binding protein increases the number of active preinitiation complexes in a human in vitro transcription system." Genes & Developments. 4. 1899-1909 (1990)

[文献書誌] 山崎 健一: "植物遺伝子のインビトロ転写法,植物細胞工学" 秀潤社, 88 (1990)

[文献書誌] 山崎 健一: "試験管内転写系による植物転写因子の機能解析,植物全能性の分子生物学" 朝倉書店, 305 (1991)

1991 年度実績報告書

山崎健一名古屋大学, 農学部, 助手 (40182480)

[文献書誌] 山崎健一: "Selective and accurate initiation of transcription at the T-DNA promoter in a soluble chromatin extract from wheat germ." Molecular & General Genetics. 209. 445-452 (1987)

[文献書誌] 山崎健一: "Accurate transcription of plant genes in vitro using a wheat germ-chromatin extract." Plant Molecular Biology Reporter. 8(2). 114-123 (1990)

[文献書誌] 山崎健一: "TGAla,a tobacco DNA-binding protein,increases the rate of initiation in a plant in vitro transcription system." Proceedings of Natinal Academie of Science. 87. 7035-7039 (1990)

[文献書誌] 片桐文章: "A Plant DNA-binding protein increases the number of active preinitiation complexes in a human in vitro transcription system." Genes & Developments. 4. 1899-1909 (1990)

[文献書誌] 山崎健一: "植物遺伝子のインビトロ転写法,植物細胞工学" 秀潤社, 88 (1990)

[文献書誌] 山崎健一: "試験管内転写系による植物転写因子の機能解析,植物全能性の分子生物学" 朝倉書店, 305 (1991)