1992 年度実績報告書

植物組織特異的な遺伝子発現機構解明のための試験管内転写系の開発

研究課題

研究課題/領域番号	03554027
研究機関	名古屋大学
研究代表者	山崎健一名古屋大学, 農学部, 助手 (40182480)
研究分担者	名取與平日清製粉株式会社, 第二研究所, 専門研究員山口淳二名古屋大学, 農学部, 助手 (10183120)
キーワード	植物 / 遺伝子発現機構 / 試験管内転写系 / インビトロ転写系 / 核抽出液 / RNAポリメラーゼII
研究概要	1.平成1年度の研究により実用可能な試験管内転写系の開発を完了した。CaMV35Sプロモーターを挿入した超ラセンプラスミドDNAを転写鋳型として用いて小麦胚芽抽出液中で転写を行なうと、プロモーターの挿入に依存した正しい長さの転写物が観察された。この後、この転写鋳型のプロモーター上流にシスエレメントを挿入したプラスミドと、そのシスエレメントに結合する転写因子との組合わせにより、塩基配列特異的・転写因子特異的な試験管内転写系を完成した。 2.平成3年度の研究において双子葉植物であるタバコの実生の根と葉より核を分離し、核抽出液を得た後、この抽出液中のRNAポリメラーゼII活性や、その阻害活性について検討したところ。まず根と葉からの核の回収が極めて難しいこと、核の抽出液の転写阻害活性が見られることが分かった。 3.平成4年度は、光合成能を失ったタバコ培養細胞であるBY2のプロトプラストを用いて核を調製したところ回収率は極めて良いことが分かった。また、この核の抽出液をもちいて、植物のプロモーターを持つ転写鋳型DNAを読ませたところ、効率の良い転写開始反応が観察された。さらに、このプロモーターのTATAエレメントに点突然変異を起こした転写鋳型DNAでは転写開始が起こらないことから、この反応がTATAエレメントに依存した忠実度の高いものであることが分かったので、非光合成器官特異的転写系のモデル系とした。 4.タバコ実生の非光合成器官である根での特異的遺伝子発現を規定するシスエレメントーR(TGACGの直列繰り返し配列)を基本転写鋳型のプロモーターの上流に挿入したプラスミドDNAを作成し、上記転写系で読ませたところ僅かではあるが、転写活性の増幅も観察された。

研究成果
(8件)

すべてその他

すべて文献書誌 (8件)

[文献書誌] 山崎健一: "Accurate transcription of plant genes in vitro using a wheat germ chromation extract." Plant molecular Biology Reporter. 8(2). 114-123 (1990)
[文献書誌] 山崎健一: "TGAla,a tobacco DNAーbinding protein,increases the rate of initiation in a plant in vitro transcription system." Proceedings of National Academie of Science. 87. 7035-7039 (1990)
[文献書誌] 片桐文章: "A Plant DNAーbinding protein increases the number of active preinitiation complexes in a human in vitro transcription system." Genes&Developments. 4. 1899-1909 (1990)
[文献書誌] 山口雄記: "Preparation of an in vitro Transcription System of Plant Origin,with Methods and Templates for Assessing Its Fiderity." Plant Mol Biol Manual.
[文献書誌] 山口淳二: "Isolation and characterization of nuclei from rice embryos" Cell Struc.Func.17. 87-92 (1992)
[文献書誌] Perata,Pierdomenico: "Effect of anoxia on starch breakdown in rice and wheat seeds" Planta. 188. 611-618 (1992)
[文献書誌] 山崎健一: "試験管内転写系による植物転写因子の機能解析,植物全能性の分子生物学" 朝倉書店, 305 (1991)
[文献書誌] 山崎健一: "植物遺伝子の転写装置とその調節機構,蛋白質核酸酵素臨時増刊号植物の分子生物学" 共立出版, 372 (1992)

1992 年度 実績報告書

植物組織特異的な遺伝子発現機構解明のための試験管内転写系の開発

研究代表者

山崎 健一 名古屋大学, 農学部, 助手 (40182480)

研究成果

[文献書誌] 山崎 健一: "Accurate transcription of plant genes in vitro using a wheat germ chromation extract." Plant molecular Biology Reporter. 8(2). 114-123 (1990)

[文献書誌] 山崎 健一: "TGAla,a tobacco DNAーbinding protein,increases the rate of initiation in a plant in vitro transcription system." Proceedings of National Academie of Science. 87. 7035-7039 (1990)

[文献書誌] 片桐 文章: "A Plant DNAーbinding protein increases the number of active preinitiation complexes in a human in vitro transcription system." Genes&Developments. 4. 1899-1909 (1990)

[文献書誌] 山口 雄記: "Preparation of an in vitro Transcription System of Plant Origin,with Methods and Templates for Assessing Its Fiderity." Plant Mol Biol Manual.

[文献書誌] 山口 淳二: "Isolation and characterization of nuclei from rice embryos" Cell Struc.Func.17. 87-92 (1992)

[文献書誌] Perata,Pierdomenico: "Effect of anoxia on starch breakdown in rice and wheat seeds" Planta. 188. 611-618 (1992)

[文献書誌] 山崎 健一: "試験管内転写系による植物転写因子の機能解析,植物全能性の分子生物学" 朝倉書店, 305 (1991)

[文献書誌] 山崎 健一: "植物遺伝子の転写装置とその調節機構,蛋白質核酸酵素臨時増刊号植物の分子生物学" 共立出版, 372 (1992)

1992 年度実績報告書

山崎健一名古屋大学, 農学部, 助手 (40182480)

[文献書誌] 山崎健一: "Accurate transcription of plant genes in vitro using a wheat germ chromation extract." Plant molecular Biology Reporter. 8(2). 114-123 (1990)

[文献書誌] 山崎健一: "TGAla,a tobacco DNAーbinding protein,increases the rate of initiation in a plant in vitro transcription system." Proceedings of National Academie of Science. 87. 7035-7039 (1990)

[文献書誌] 片桐文章: "A Plant DNAーbinding protein increases the number of active preinitiation complexes in a human in vitro transcription system." Genes&Developments. 4. 1899-1909 (1990)

[文献書誌] 山口雄記: "Preparation of an in vitro Transcription System of Plant Origin,with Methods and Templates for Assessing Its Fiderity." Plant Mol Biol Manual.

[文献書誌] 山口淳二: "Isolation and characterization of nuclei from rice embryos" Cell Struc.Func.17. 87-92 (1992)

[文献書誌] 山崎健一: "試験管内転写系による植物転写因子の機能解析,植物全能性の分子生物学" 朝倉書店, 305 (1991)

[文献書誌] 山崎健一: "植物遺伝子の転写装置とその調節機構,蛋白質核酸酵素臨時増刊号植物の分子生物学" 共立出版, 372 (1992)