| 研究課題/領域番号 |
03557024
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| 研究機関 | 自治医科大学 |
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研究代表者 |
中野 昌康 自治医科大学, 医学部, 教授 (70048958)
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| 研究分担者 |
切替 照雄 自治医科大学, 医学部, 助手 (50192563)
白井 誠 茨城大学, 農学部, 助教授 (10007792)
滝 龍雄 北里大学, 衛生学部, 助教授 (70049097)
斉藤 慎二 自治医科大学, 医学部, 助手 (50195989)
松浦 基博 自治医科大学, 医学部, 助教授 (20150089)
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| キーワード | シアノバクテリア / ミクロシスチン / Microcystis aeruginosa / 抗菌活性物質 / 培養法 / インターロイキン6 / モノクローナル抗体 / gamma-linolenic acid |
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| 研究概要 |
Microcystis aeruginosa K-81菌体破砕液より50%メタノールにより抗菌活性物質を抽出し、シリカゲル薄層クロマトグラフィー、C18カートリッジカラム、LH20セファデックスカラムクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィーで精製した。精製された抗菌活性物質をGC/MSにより分析したところ、分子量278で、そのretention timeとマススペクトルはgamma-linolenic acidと一致した。
大量培養システムによるミクロシスチンの生産について検討した。ミクロシスチン生産菌M.aeruginosa K-139株をCB培地(pH10.0)を用い、照度10000lux、通気量9L/minで培養し、培養液のpHがpH9〜10になるようにlNHClを添加して調整した。7日目に生育は最大となり、その時のミクロシスチン生産量は27.493mg/10Lと静置培養の3倍、pH未制御の大量培養法の1.5倍であった。
ミクロシスチンノモノモロナール抗体を作成した。microystin-LRとbovine serum albimunの複合体をマウスに投与し、常法によりhycidoma cell lineよりモノクロナール抗体を調整した。このモノクロナール抗体はmicroycstinLRと反応するだけでなく、microcystin-RR,7-desmethylmicrocystin-LR,3,7-didesmethylmicrocystin-LRとも反応した。
大量培養して精製したミクロシスチンを用い、サイトカインの産生誘導活性ついて検討した。ミクロシスチンを投与したマウスでインターロイキン6の産生誘導が観察され、この誘導は投与したミクロシスチン量に比例した。
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