| 研究概要 |
前年度に引き続き、腸上皮細胞Caco-2、腎上皮細胞LLC-PK_1を多孔性フィルター(Transwell^<TM>)上で培養した細胞シートを用いて薬物輸送実験を行い、吸収・分泌の評価系として培養上皮細胞系の有用性について検討した。
1.Caco-2細胞シートによる腸管吸収の評価:種々のセファロスポリン系抗生物質の経細胞輸送を測定し、薬物の構造と輸送活性との相関性を調べた。経口用のcephradine,cephalexin(両性イオン)及びceftibuten(アニオン)の細胞内蓄積は、いずれもジペプチドの共存によって顕著に抑制されること、頂側膜側のpHに依存することなどから、H^+/ジペプチド共輸送体の余与が示された。一方、注射用のcefotiamの蓄積は著しく低く、また方向性のある輸送活性は認められなかった。これらは腸管吸収の結果とよく対応する。更にcephradineの側底膜輸送について輸送の方向性や阻害剤感受性などを調べた結果、測底膜にも刷子縁膜とは異なったジペプチド輸送体が発現しており、経口用セファロスポリンの膜輸送を媒介していることがわかった。
2.LLC-PK_1細胞シートによる尿細管分泌の評価:カチオン性薬物tetraethylammonium(TEA),cimetidine,procainamide,quinidineの細胞内取り込みと経細胞輸送を測定した結果、これら薬物は測底膜側から濃縮的に細胞内蓄積され、頂側膜側へ方向選択的に輸送され、尿細管分泌と対応する結果を得た。また頂側膜を介したTEAの輸送に伴って細胞内pHの低下が観察され、H^+とTEAとの交換輸送が直接的に確認された。更に、有機カチオン輸送体の活性調節機構について検討したところ、側底膜に局在する有機カチオン輸送体は細胞内外の環境pHによって調節されていること、一方頂側膜のH^+/有機カチオン逆輸送体は細胞膜を介するpH勾配によって輸送の方向性と活性が制御されていることが示された。
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