1991 年度実績報告書

コレステリルエステル転送蛋白の酵素免疫測定法の確立とその臨床応用

研究課題

研究課題/領域番号	03557117
研究機関	大阪大学
研究代表者	松沢佑次大阪大学, 医学部, 教授 (70116101)
研究分担者	砂原憲之大日本製薬株式会社, ラボラトリープロダクツ部, 開発部長酒井尚彦大阪大学, 医学部附属病院, 医員船橋徹大阪大学, 医学部附属病院, 医員久保正治大阪大学, 医学部, 講師 (50161667)
キーワード	コレステリルエステル転送蛋白 / 酵素免疫測定法 / モノクロ-ナル抗体 / ポリクロ-ナル抗体 / Baculovirus expression system
研究概要	平成3年度の研究により、フェニルセファロ-ス、DEAE-セファデックス、サクシニル-LDLセファロ-ス、ハイドロキシルアパタイトクロマトグラフィ-によるヒト血清からのCETP製精に成功した。精製CETPは分子量約68,000のほぼ単一バンドであり、これを抗原としてマウスを免疫し、ミエロ-マ細胞とのハイブリダイゼ-ションにより、ELISAにて陽性のクロ-ンを約10個得た。現在、Western blottingによって強い陽性反応を示すクロ-ンを選択中で、これにより抗原との反応性を検討した後、酵素免疫法を確立する予定である。また、同じ抗原を用いてヤギを免疫し、多クロ-ン抗体を得ることも試みている。本法をキット化するには多量のCETPの標準抗原が必要であるが、これを得るのに通常の精製法では多くのステップを要し、収率も十分ではない。そこで、我々は昆虫由来のBaculovirus expression systemを用いて、ヒトCETPのfull length cDNAをpVL1392expression vectorに組み込み、これをpolyhedrin promotorを有するACNPVとのhomologous recombinationにより、polyhedrinを細胞内に有しないプラ-クを選択することにより、CETP遺伝子を発現するクロ-ンをスクリ-ニングした。さらに、培養液中へCETP活性を分泌するクロ-ンを発見し、このクロ-ンの培養液中からCETPを精製せんと現在試みている。他方、CETP阻害因子の精製も進んでおり、阻害因子活性を有する分画を得ているが、活性は必ずしも高くなく、他の蛋白の混在もあり、さらに純粋な標品を得るべく検討を進めている。以上の研究過程において、血清からCETP及びその阻害蛋白を分離精製する際の第一段階の超遠心分離のため、Beckman超遠心機とスウィングロ-タ-を購入して使用した。

研究成果
(7件)

すべてその他

すべて文献書誌 (7件)

[文献書誌] Shizuya Yamashita et al.: "Total deficiency of plasma cholesteryl ester transfer protein in subjects homozygous and heterozygous for the intron 14 splicing defect." Biochem.Biophys.Res.Commun.179. 1346-1351 (1990)
[文献書誌] Shizuya Yamashita et al.: "Accumulation of apolipoprotein E-rich high alensity lipoproteins in hyperalphalipoproteinemic human subjects with plasma cholesterylester transter protein deficiency." J.Clin.Invest.86. 688-695 (1990)
[文献書誌] Yuhya Ueyama et al.: "Hypocholesterolemic factor from gallbladder cancer cells." Lancet. 336. 707-709 (1990)
[文献書誌] Takashi Kobatake et al.: "Age-related changes in adrenergic α_1,α_2 and β recoptors of rat coll membranes:An analysis usin 〔 ^3H〕 bunazosin as a novel ligand for the α_1 adrenoreceptor." J Lipid Res.32. 191-196 (1991)
[文献書誌] Shizuya Yamashita et al.: "Characterization of plasma lipopioteins in patients heteiozygous for human plasma chdesteryleste,transter protein(CETP) deficiency:plasma CETP ragulates high-density lipopretein concentration and conposition." Metabolism. 40. 756-763 (1991)
[文献書誌] Naohiko Sakai et al.: "Detection of two species of low density lipoprotein particles in cholesleryl esten transter protein deficiency."
[文献書誌] 垂井清一郎編: "内科MOOK42,動脈硬化" 金原出版,

1991 年度 実績報告書

コレステリルエステル転送蛋白の酵素免疫測定法の確立とその臨床応用

研究代表者

松沢 佑次 大阪大学, 医学部, 教授 (70116101)

研究成果

[文献書誌] Shizuya Yamashita et al.: "Total deficiency of plasma cholesteryl ester transfer protein in subjects homozygous and heterozygous for the intron 14 splicing defect." Biochem.Biophys.Res.Commun.179. 1346-1351 (1990)

[文献書誌] Shizuya Yamashita et al.: "Accumulation of apolipoprotein E-rich high alensity lipoproteins in hyperalphalipoproteinemic human subjects with plasma cholesterylester transter protein deficiency." J.Clin.Invest.86. 688-695 (1990)

[文献書誌] Yuhya Ueyama et al.: "Hypocholesterolemic factor from gallbladder cancer cells." Lancet. 336. 707-709 (1990)

[文献書誌] Takashi Kobatake et al.: "Age-related changes in adrenergic α_1,α_2 and β recoptors of rat coll membranes:An analysis usin 〔 ^3H〕 bunazosin as a novel ligand for the α_1 adrenoreceptor." J Lipid Res.32. 191-196 (1991)

[文献書誌] Shizuya Yamashita et al.: "Characterization of plasma lipopioteins in patients heteiozygous for human plasma chdesteryleste,transter protein(CETP) deficiency:plasma CETP ragulates high-density lipopretein concentration and conposition." Metabolism. 40. 756-763 (1991)

[文献書誌] Naohiko Sakai et al.: "Detection of two species of low density lipoprotein particles in cholesleryl esten transter protein deficiency."

[文献書誌] 垂井 清一郎編: "内科MOOK42,動脈硬化" 金原出版,

1991 年度実績報告書

松沢佑次大阪大学, 医学部, 教授 (70116101)

[文献書誌] 垂井清一郎編: "内科MOOK42,動脈硬化" 金原出版,