1992 年度実績報告書

コレステリルエステル転送蛋白の酵素免疫測定法の確立とその臨床応用

研究課題

研究課題/領域番号	03557117
研究機関	大阪大学
研究代表者	松沢佑次大阪大学, 医学部, 教授 (70116101)
研究分担者	砂原憲之大日本製薬株式会社, ラボラトリープロダクツ部・開発部, 開発部長酒井尚彦大阪大学, 医学部・附属病院, 医員船橋徹大阪大学, 医学部, 助手 (60243234)
キーワード	動脈硬化 / コレステロール逆転送 / コレステリルエステル転送蛋白 / 単クローン抗体 / 酵素免疫測定法
研究概要	我々はヒト血漿を用いてコレステリルエステル転送蛋白(CETP)の精製を行った。精製CETPはSDS電気泳動上分子量約68,000の単一蛋白で合計約2mgのCETPを精製し得た。これをマウスに免疫し、免疫後に脾リンパ球細胞とマウスミエローマ細胞株を融合させハイブリドーマを作成した後、CETPに対するモノクローナル抗体産性細胞のクローン化を行った。この際のスクリーニングの手段として精製したCETPをプレートに固相化して培養上清中の抗体の存在を測定する固相法とβ-galactosidaseでラベルしたCETPを用いて培養上清と反応後のβ-galactosidase活性を追跡する我々独自の方法とを合わせて用いた。約200個のクローンをスクリーニングした結果、2個の強陽性を示すクローンが得られた。しかし、この陽性クローンをマウスの腹腔内に注入し、腹水抗体を上記の方法にて検討した結果、これらの両クローンの抗体価は必ずしも高くはなく、単クローン抗体として酵素免疫法に用いるには不適当と思われたため、現在再度マウスに免疫中である。また、CETPの静活部位として重要であるC末端側の合成ペプタイドを用いての免疫も試みている。この酵素免疫法の開発と並行して我々はCETP遺伝子異常の検討を行っている。すでにCETP遺伝子のイントロン14のsplice donor siteの1塩基変異(G→A)による高HDL血症症例を報告しているが、この遺伝子異常は健診受診者512名中5例に存在し、わが国の一般人口におけるこの遺伝子変異は約100人に1人と高率に存在することが明かとなった。さらに我々はエクソン15の中に新たなmissense変異(A→G)も発見した。これらのことはCETP蛋白測定の必要性を示すものである。また、このようなCETP遺伝子の異常はわが国においてのみしか発見されておらず、この酵素免疫法を確立することは各種高HDL血症の成因の診断に有用であると思われる。

研究成果

(7件)

すべてその他

すべて文献書誌 (7件)

[文献書誌] Hirano,K.et al: "Polydisperse low-density lipoproteins in hyperalphal ipoproteinemic chronic alcohol drinkers in association with marked reduction of cholesteryl ester transfer protein activity" Metabolism. 41. 1313-1318 (1992)
[文献書誌] Hirano,K.et al: "Low-density lipoproteins in hyperalphalipoproteinemic heavy alcohol drinkers have reducod affinity for the low-density lipoprotein reccptor." Clin.Biochem. 25. 357-362 (1992)
[文献書誌] Yamashita,S.et al: "A delayed-addition enzyme rimmunoassay for the relative cholesteryl ester transfer protein mass in patients with deficient plasma cholesteryl ester transter activity." Clin Chim Acta. 194. 145-160 (1990)
[文献書誌] Nakamura,T.et al: "Non-macrophage-related accumulation of cho lesterd during probucol treatment in familial hyper cholestero lemia; report of two cases." Atherosclerosis. 92. 193-202 (1992)
[文献書誌] 山下静也,他: "HDLと動脈硬化" 日本内科学会雑誌. 81. 1806-1812 (1992)
[文献書誌] 山下静也,他: "高HDL血症とCETP" 最新医学. 47. 979-987 (1992)
[文献書誌] 野崎秀一他: "メディコピア(27)高脂血症をめぐって(亀田治男他編集) ー第3章,2,高カイロミクロン血症 P150-158" 富士レビオ, 285 (1992)

1992 年度 実績報告書

コレステリルエステル転送蛋白の酵素免疫測定法の確立とその臨床応用

研究代表者

松沢 佑次 大阪大学, 医学部, 教授 (70116101)

研究成果

[文献書誌] Hirano,K.et al: "Polydisperse low-density lipoproteins in hyperalphal ipoproteinemic chronic alcohol drinkers in association with marked reduction of cholesteryl ester transfer protein activity" Metabolism. 41. 1313-1318 (1992)

[文献書誌] Hirano,K.et al: "Low-density lipoproteins in hyperalphalipoproteinemic heavy alcohol drinkers have reducod affinity for the low-density lipoprotein reccptor." Clin.Biochem. 25. 357-362 (1992)

[文献書誌] Yamashita,S.et al: "A delayed-addition enzyme rimmunoassay for the relative cholesteryl ester transfer protein mass in patients with deficient plasma cholesteryl ester transter activity." Clin Chim Acta. 194. 145-160 (1990)

[文献書誌] Nakamura,T.et al: "Non-macrophage-related accumulation of cho lesterd during probucol treatment in familial hyper cholestero lemia; report of two cases." Atherosclerosis. 92. 193-202 (1992)

[文献書誌] 山下 静也,他: "HDLと動脈硬化" 日本内科学会雑誌. 81. 1806-1812 (1992)

[文献書誌] 山下 静也,他: "高HDL血症とCETP" 最新医学. 47. 979-987 (1992)

[文献書誌] 野崎 秀一他: "メディコピア(27)高脂血症をめぐって(亀田治男他編集) ー第3章,2,高カイロミクロン血症 P150-158" 富士レビオ, 285 (1992)

1992 年度実績報告書

松沢佑次大阪大学, 医学部, 教授 (70116101)

[文献書誌] 山下静也,他: "HDLと動脈硬化" 日本内科学会雑誌. 81. 1806-1812 (1992)

[文献書誌] 山下静也,他: "高HDL血症とCETP" 最新医学. 47. 979-987 (1992)

[文献書誌] 野崎秀一他: "メディコピア(27)高脂血症をめぐって(亀田治男他編集) ー第3章,2,高カイロミクロン血症 P150-158" 富士レビオ, 285 (1992)