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セロビオ-ス及びセロデキストリンフォスフォリラ-ゼの酵素の諸性質の解明とその応用を目的としてまず、セロビオ-スフォスフォリラ-ゼ生産菌の検索を行い、1細菌の分離(エルビニア属)に成功し、その酵素の性質の解明を行った。ついで、クロストリジウムサ-モセラムのセロビオ-ス及びセロデキストリンフォスフォリラ-ゼノ精製を行い、酵素の諸性質も明らかにすることができた。本研究は以上の成果の上にたち、これらの酵素遺伝子のクロ-ニングを行い、酵素を大量に生産する系を構築し、酵素の利用を目的として計画されたものである。
クロストリジウムサ-モセラムの菌体内抽出液からセロビオ-ス及びセロデキストリンフォスフォリラ-ゼを各種カラムクロマトグラフィ-により精製した。ついで、これらのN末端付近アミノ酸配列をアミノ酸シクエンサ-で分析したところ、約40残基の配列を決定することができた。これをもとにして合成DNAプロ-ブをつくり、常法に従い遺伝子のクロ-ニングを行ったところ、3株の陽性株がとれた。しかし、塩基配列を調べたところ、プロ-ブ部分とは一致するが、他の部分の配列が一致せず目的の遺伝子ではないことが判明した。そこで現在、酵素蛋白をプロテア-ゼ等で断片化して、そのペプチドを高速液体クロマト等で純化し、それらのアミノ酸配列を調べている。この結果を利用して新たなプロ-ブを作り、遺伝子のクロ-ニングを行おうとしている。
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