ラットのホルモン分泌腫瘍におけるGTP結合タンパク質の変異

1991 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 03670118
• 研究機関: 筑波大学
• 研究代表者: 三輪 正直 筑波大, 基礎医学系, 教授 (20012750)
• 研究分担者: 内田 雅子 筑波大, 基礎医学系, 助手 (40223565) ; 内田 和彦 筑波大, 基礎医学系, 講師 (90211078)
• キーワード: Gタンパク質 / ras遺伝子 / PCRーSSCP / 癌 / LCR

研究概要

細胞の増殖は細胞外のシグナルがGタンパク質などを介して核へ伝達されることによって制御されている。これらのGタンパク質の変異は、細胞の増殖に大きな影響を与えると考えられる。そこで、化学発癌物質で誘発したラットとハムスタ-の癌やヒト癌細胞、細胞株について、Gs、Gi、Goのαサブユニット遺伝子、低分子量Gタンパク質であるras遺伝子についてその塩基配列の変異を調べた。材料はヒト膵癌培養細胞Panc1、ヒト卵巣腫瘍と子宮癌組織、ラット、及びハムスタ-の膵癌(膵管由来)RPD及びHPD、ラット骨肉腫(自然発生と4ーHAQO誘発腫瘍)で高肺転移系とそうでないもの、及び4ーHAQO誘発MFHを用いた。ADPーリボシル化部位のあるGsα遺伝子の201番目(Arg)と227番目(Gln)のアミノ酸の変異を検出できるプライマ-と、Gi2αの179番目(Arg)と205番目(Gln)のアミノ酸の変異を検出できるプライマ-を用いてPCRーSSCP法を行った。その結果、ハムスタ-継代膵癌(HPD)においてGsαのプライマ-を用いてPCRーSSCPを行った結果、正常と異なる移動度を示すバンドが検出された。他の検体については、正常と異なる移動度を示すバンドは得られていない。Gi2αについては、現在のところ、変異、欠失を示唆するPCRーSSCPのデ-タは得られていない。今後、Gsα遺伝子の変異や欠失などの変化を塩基配列を決定する事により同定する。また、PCRーSSCP法以外の遺伝子の変化を検出するシステムの開発、改良を試み、現在、Ligation chain reaction(LCR)法を用いて、変異の検出を試み、睾丸腫瘍でkiーrasー2の変異を示唆する結果が得られた。
さらに癌における多重遺伝子の変化について調べる予定である。

研究成果

• [文献書誌] Okamoto,T.;Ohno,Y.;Miwa,M.: "Multiーstep carcinogenesis model for adult Tーcell leukemia." Jpn.J.Cancer Res.80. 191-195 (1989)
• [文献書誌] Sato,Y.;Mukai,K.;Matsuno,Y.;Furuya, ;Miwa,M.;Shimosato,Y.: "The AMex method: a multipurpose tisseuーprocessing and paraffinーembedding method II.Extraction of spooled DNA and its pplication to Southern blot hybridization analysis." Amer.J.Pathol.136. 267-271 (1990)
• [文献書誌] Okamoto,T.;Miwa,M.;Shimotohno,K.: "Stochastic analysis of the carcinogenesis of adult Tーcell leukemia/lymphoma." Human Retrovirology. 307-313 (1990)
• [文献書誌] Ikejuma,M.;Noguchi,S.;Miwa,M.: "The zink fingers of human poly (ADPーribose) polymeraseare differentially required for the recognition of DNA Brakes and nicks and the consequent enzymatic activation" J.Biol.Chem.265. 21907-21913 (1990)
• [文献書誌] Suga,T.;Uchida,M.;Uchida,K.;Miwa,M.: "Infection of rats with HTLVー1:a small animal model for HTLVー1 carriers." Int.J.Cancer.49. 764-769 (1991)
• [文献書誌] Menegazzi,M.;ZucconiーGrassi,G.;Miwa,M.: "Differential expression of poly(ADPーribose) polymerase and DNA polymerase β in rat tissues." Exptl.Cell Res.197. 66-74 (1991)
• [文献書誌] Miwa,M.and Uchida,K.: "Poly (ADPーribose) polymerase;structure,expression,and biological function.In:The Postーtranslational Modification of ProteinsーRoles in Molecular and Cellular Biology" Tsuboi,S.;Katsunuma,N.;Taniguchi,N.,