抗高脂血漿剤で誘導される新たに見い出した肝アセチルCoA水解酵素の医化学的研究

1992 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 03670123
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 礒橋 文秀 大阪大学, 医学部, 講師 (20115992)
• キーワード: アセチルCoA水解酵素 / 抗高脂血薬剤 / パーオキシゾーム増殖 / クロフィブレート / ノンゲノトキシツク発癌 / ステロイドホルモンレセプター / クロフィブレートレセプター / レセプタースーパーファミリー

研究概要

本年度は、報告者により発見された肝細胞質型アセチルCoA水解酵素をラット肝より、単一にかつ多量に精製する方法を新たに開発した。この純品酵素を多量に用いて家兎に免疫し、昨年度に調整した抗体よりさらに力価と特異性の高いポリクローナル抗体を得ることが出来た。本抗体を用いて、ウェスタンブロット法を行うと、細胞質画分の本粗酵素を感度よく、特異的に定量することが可能となった。
近年、抗高脂血薬剤(パーオキシゾーム増殖剤)クロフィブレートはステロイドホルモンレセプターと類似した細胞内レセプターをトランスジューサーとする遺伝子発現調節機構を介して作用を発現している事が明らかにされて来た。本酵素はクロフィブレート投与で著明な酵素活性の増大が認められる。0.5%クロフィブレート含有食を18ケ月間投与したラット肝の本酵素をウェスタンブロット法で解析すると、本酵素蛋白は約4倍にも増大し、誘導を受けていることが明らかとなった。以上より、本酵素はクロヒブレートのマーカー酵素となり得、さらにパーオキシゾーム増殖機構やノンゲノトキシック発癌機構解明に有用な手段を提供すると考えられる。更にウェスタンブロット法でパーオキシゾームに存在する本酵素を解析したが、細胞質型酵素と免疫化学的にも分子量的にも異っていなかった。生化学的にも細胞質型の特性を備えており、同一酵素である事が示唆された。
一方、本酵素のcDNAより一次構造解析の為、多量精製した単一酵素をV_8プロテアーゼとリシンエンドペプチダーゼでペプチド断片に分解し、N未アミノ酸配列を決定した。現在このアミノ酸配列より、ラットmRNAから本アセチルCoA水解酵素のcDNAを増幅させ、本酵素の一次構造の決定作業を行っている。

研究成果

• [文献書誌] Nakanishi,Y.,: "The Effects of Chronic Administration of Peroxisome Proliferator,Clofibrate,on cytosolic Acetyl-CoA Hydrolase in Rat Liver" Biochemical Pharmacology. (1993)
• [文献書誌] 上田 清隆: "グルココルチコイド受容体実験法" 生物薬科学実験講座. (1993)
• [文献書誌] Isohashi,F.,: "ATP-Stimulated Translocation Promoter that Enhances the Nuclear Binding of Activated Glucocorticoid Receptor Complex:Biochemical Properties and Its Function" Receptor. (1993)
• [文献書誌] 礒橋 文秀: "受容体の構造と機能研究法" 新生化学実験講座. 9. 199-208 (1992)
• [文献書誌] Okamoto,K.,: "Rat Hepatic ATP-stimulated Translocation Promoter that Enhances the Nuclear Binding of Activated Glucocorticoid Receptor Complex" Neuroendo.Res.Meth.,. 2. 653-672 (1992)
• [文献書誌] 礒橋 文秀: "ラット肝ATP感受性アセチルCoA水解酵素のパーオキシゾーム画分と細胞質画分における解析" ビタミン. 67. 79- (1993)