インフルエンザウイルスに対する動物血清インヒビタ-の精製及びin vivo効果

1991 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 03670234
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 若宮 伸隆 大阪大学, 微生物病研究所, 助手 (20210867)
• キーワード: インフルエンザウイルス / インヒビタ- / シアル酸 / HanganutziuーDeicher(HD)抗原

研究概要

インフルエンザウイルスには動物血清により、感染阻害がおこる現象が認められ、それぞれの道物血清中に特異的ウイルスインヒビタ-が含まれていると考えられている。今年度は、シアル酸をもつ糖蛋白を、生物学的活性をそこなわずに単離、精製を試み、以下の結果を得た。
1.ウマ血清より、インフルエンザウイルスインヒビタ-の精製、解析の赤血球凝集阻止反応(HI)を指標として、ウマ血清を硫酸アンモニウム沈殿、RCAーアガロ-スクロマトグラフィ-にて、相精製し、ゲルクロマトグラフィ-により分子量60万の糖蛋白(HDGP1)を精製した。本蛋白は、SDSーPAGEより分子量7万2千(72P)と2万8千(20P)の2角のsubunitより構成される蛋白であり、レクチン親和性は、RCA≫LCAであり、ConA,WGAには、まったく親和性は認められなかった。さらに構成蛋白のひとつである72Pは、Nーグリカナ-ゼEndoFに感受性があり、Nグリコシド結合をもった複合型糖鎖の存在が示唆された。
2.HDGP1の抗インフルエンザウイルス活性についての検討。
HDGP1のHI価は、0.1mg/mlにて640であり、本活性は耐熱性(56℃,30分)で,Sialidase耐性,Dーマンノ-ス,Nアセチルグルコサミンの添加により阻害できなかった。しかしKIO_4処理で完全に活性が損われることより、Sialidase耐性のシアル酸をもつ糖蛋白であることがわかった。又中和確は、0.1mg/mlにて160で、HI価と差違が見られた。
1,2,の結果よりウマ血清には従来報告されているαーmacroglobulin以外に新しいインヒビタ-が存在しており、本蛋白がシアル酸を含む耐熱性蛋白であり、中和価が若干低いことより、Fracisらの提唱するα因子に相当するものであることが示唆された。

研究成果

• [文献書誌] N.Wakamiya,Y.Osada,D.Q.Wang,K.Nakajima,S.Kato,T.Kurimura,M.Naiki.: "Expression of HanganutziuーDeicher antigen in activated human T lymphocytes" Biochemical Biophysical Research Communications. 81. 310-315 (1991)
• [文献書誌] H.Takeyama,N.Wakamiya,C.OHara,K.Arthur,J.Niloff,D.Kufe,K.Sakarai,D.Spriggs.: "Tumor necrosis factor expression by human ovarian carcinoma in vivo" Cancer Research. 51. 4476-4480 (1991)
• [文献書誌] T.Nishimura,Y.Togashi,N.Wakamiya,Y.Hashimoto,H.Yagita,K.Okumura,S.Habu.: "T cell receptorーindependent cellーmediated cyrotoxity by nude mouse lymphokeineーactivated killen cells" Japan Journal of Cancer Research(Gann). 82. 448-455 (1991)
• [文献書誌] H.Asaoka,S.Nishinaka,N.Wakamiya,H.Matsuda,M.Murata: "Two chicken monoclonal antibodies specific for beteroplile HanganutzinーDeicher antigens" Immunological Letters.
• [文献書誌] N.Wakamiya,T.Kurimura,Y.Okuno,F.Sasao,S.Ueda,K.Yoshimatsu,M.Naiki.: "The mannose binding protein and conglutinin in bovine serum have a antiviral activity against influenza virus" Glycoconjugate Journal. 8(3). 235 (1991)