幼弱B細胞の分化を駆動させるcDNAクロ-ンの単離

1991 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 03670249
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 杉山 治夫 大阪大学, 医学部, 助手 (70162906)
• 研究分担者: 中川 雅史 大阪大学, 医学部附属病院, 医員 ; 相馬 俊裕 大阪大学, 医学部附属病院, 医員 ; 三宅 正剛 大阪大学, 医学部附属病院, 医員 ; 岡 芳弘 大阪大学, 医学部附属病院, 医員
• キーワード: 幼若B細胞 / cDNAサブトラクション / Abelsonマウス白血病ウイルス

研究概要

Abelsonマウス白血病ウイルスでトランスフォ-ムしているため、許容温度(35℃)で培養すると増殖すのみであるが、非許容温度(39℃)で培養すると、分化が誘発される未熱B細胞株SPL2ー1ー2を用い、幼弱B細胞の分化を駆動させるcDNAクロ-ンの単離を試みた。許容温度で維持しているSPL2ー1ー2の培養温度を、非許容温度に上げてから7日目の細胞(分化が強く誘発されている時期)から、ployA^+RNAを抽出し、f1 originをもったvectorを用いてcDNAライブラリ-からf1 oriを用いて、antiーsense ssDNAを作製し、一方、Abelsonウイルスでトランスフォ-ムした線維芽細胞及びプラズマ細胞からmRNAを抽定し、biotin化した。このbiotin化mRNAと先のantiーsense ssDNAとの間で、hybridizationを行ない、avidinカラムを用いて、hybridizeしなかったantiーsense ssDNAを集めdsDNAに換え、SPL2ー1ー2にのみ発現し、線維芽細胞やプラズマ細胞では発現しないcDNAクロ-ンを単離した。そのうちの1つのcDNAクロ-ンであるSPL212ー1は、リンパ球のみに特異的に発現することが、Northern法を用いた解析で判明した。このcDNAクロ-ンの塩基配列から、216コのアミノ酸からなり、ロイシンが個、連続して存在する、今までに報告のない新しいタンパクであることがわかった。現在、生物学的機能を解析中である。

研究成果

• [文献書誌] Y.Minami: "Monoclonal antiーV_H141 antibodies that specifically recognize the heavy chain variable region of,and closely related to,MOPC141 myeloma protein whose V_H gene belongs V_HQ52 family" Immunology. 72. 464-470 (1991)
• [文献書誌] M.Nakagawa: "cDNA cloning of the murine 30ーkDa protein homologous to the 32ーkDa subunit of human replicatoin protein A" Nucleic Acid Research. 19. 4292 (1991)
• [文献書誌] Y.Oka: "Transitory expression of Thyー1 antigen in immature B cell lines" Immunological Investigations. 21. 85-92 (1992)
• [文献書誌] S.Tsukada: "Continuing Vγ_2 to Jγ_2 rearrangements of murine T cell receptor gamma genes in a Bーcommitted immature cell line" Molecular Immunology.
• [文献書誌] S.Tsukada: "Nucleotide deletion of T cell receptor Vγ_2 and Jγ_2 coding sequences at Vγ_2ーJγ_2 junctions in immature B cell line" Molecular Immunolgy.
• [文献書誌] Y.Shimizu: "Regulation of Thyー1 gene expression by the methlation of the 5' region of Thyー1 gene and intracellular regulatory factors in immature B cells." Immunological Investigations.