PCR法によるパラフィン切片からのDNA法医病理診断

1991 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 03670295
• 研究機関: 信州大学
• 研究代表者: 福島 弘文 信州大学, 医学部, 教授 (70135218)
• キーワード: PCR / ウイルス / ホルマリン / DNA / 組織 / セントリコン30 / タイピング / 増幅

研究概要

法医DNA診断には血液、精液、毛髪等が比較的多く用いられてきた。形態学的検査として病理組織が利用されており、最近ではホルマリン固定パラフィン包埋組織からウイルス、ガン、遺伝子疾患のDNA解析が可能となり、診断としての利用価値が高くなりつつある。パラフィン包埋組織やホルマリン固定組織を用いる場合、組織のDNAの安定性が重要となる。本研究では、一定期間保存されたホルマリン固定組織やパラフィン包埋組織からテンプレ-トDNAを抽出し、(1)HLAのDNAからタイピング、(2)性別判定、(3)サイトメガロウイルス診断等について検討した。方法としてパラフィン包埋組織、ホルマリン固定組織から5μmの厚さの5〜6枚の組織を切り出し脱パラフィン処理後、PRoteinase KとSDSで完全に液状に可溶化を行ない、フエノ-ルで抽出後、微量濃縮チュ-ブ(セントリコン30)でテンプレ-トDNAを濃縮し、PCR法によってDNAを増幅した。その結果、(1)2年間保存したパラフィン包埋組織および2年間ホルマリン固定組織(脳、心、肝、肺、腎)からDNAタイピングが可能であった。(2)男女性別判定には男性を示す170bpのバンドが確認された。(3)サイトメガロウィルス感染の診断検査として肺、心のパラフィン包埋組織を用いたところ、その診断が可能であった。抽出方法を比較し、フェノ-ル・エタノ-ル沈殿法よりセントリコン30を用いた方がよりDNAを回収しやすいことを明らかにした。

研究成果

• [文献書誌] Fukushima H.: "Using the immunostaining method and the polymerase chain reaction amplification for identifying mixedーup formalinーembedded tissues" Proc Internatl Symp Advances in Legal Medicine. 263-265 (1990)
• [文献書誌] Ota M.: "Application of modified PCRーRFLP method in forensic science." Proc Internatl Symp Advances in Legal Medicine. 474-476 (1990)
• [文献書誌] Ota M.: "Modified PCRーRFLP method for HLAーDPB1 genotyping." Tissue Antigens.38. 60-71 (1991)
• [文献書誌] Fukushima H.: "DNA typing from formalinーfixed,paraffinーembedded tissues." Advances in Forensic Haemogenetics.4. (1991)
• [文献書誌] Ichinose A.: "HLAーDQA1 and HLAーDPB1 gene polymphisms in the Japanese population." Advences in Forensic Haemogenetics.4. (1991)
• [文献書誌] Tanaka K.: "Sex determination in bloodstains and single hairs." Advances in Forensic Haemogenetics.4. (1991)
• [文献書誌] 福島 弘文: "ヒトDNA polymorphism実験技術と応用,分担:ゲノムDNAの精製" 東洋書店, (1991)
• [文献書誌] 福島 弘文: "ヒトDNA polymorphism実験技術と応用,分担:DNA標識法" 東洋書店, (1991)