| 研究課題/領域番号 |
03670326
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| 研究機関 | 九州大学 |
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研究代表者 |
石橋 大海 九州大学, 医学部, 講師 (80127969)
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| 研究分担者 |
工藤 二郎 九州大学, 医学部, 助手 (90148940)
平田 泰彦 九州大学, 医学部, 助手 (10218787)
中村 稔 九州大学, 医学部, 助手 (40217906)
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| キーワード | 原発性胆汁性肝硬変症 / 抗ミトコンドリア抗体 / Bリンパ球 / 抗体産生異常 / 自己免疫性疾患 / 自己抗体 / ピルビン酸脱水素酵素複合体 / 2ーオキソグルタル酸脱水素酵素複合体 |
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| 研究概要 |
原発性胆汁性肝硬変症(PBC)に特異的に出現する抗ミトコンドリア抗体の対応抗原として明らかになったピルビン酸脱水酵素複合体(PDC)および2ーオキソグルタル酸脱水酵素複合体(OGDC)の精製標品を用いて、PBC患者末梢血のBリンパ球レパ-トリ-の解析と特異抗体産生Bリンパ球株のクロ-ニングを試み、以下のような成果が得られた。
1.PBC患者血清中の抗PDC、抗OGDC抗体の免疫グロブリン・クラス別の測定系(ELISA)を確立した。
2.ELISAを用いてPBCや他の疾患における患者血清中抗PDC、OGDC抗体の陽性率を検討した結果、いずれもPBCに特異的であった。
3.PBC患者末梢血より採取したBリンパ球に、Epstein Barr virusを感染後限界希釈法にて培養し、培養上清中に分泌される抗PDC、OGDC抗体をELISAにて測定することにより、患者末梢血中に存在する抗PDC、OGDC抗体産生Bリンパ球の頻度を算出した。
4.また、血清中の抗ミトコンドリア抗体の抗体価や肝の病理組織所見と比較検討した結果、Bリンパ球レパ-トリ-はPBCのStageとは必ずしも相関しなかったが、肝組織侵潤リンパ球の程度とは相関し、疾患の活動性を表わすことが示唆された。
5.抗PDC、OGDC抗体産生EBVーtransformed cell lineを樹立し、さらにF3B6 cellと細胞融合することにより、計4個の安定した、ヒト型抗PDC、OGDC抗体産生株を樹立した。
6.得られたモノクロ-ナル抗体は、それぞれPDCのE_2、X、OGDCのE_2と特異的に反応し、in vitroにてそれぞれの酵素活性を抑制した。
7.エピト-プと考えられる領域の合成ペプチドを作製し、ELISAにて各ペプチドの抑制球をみた結果、エピト-プ領域を推定することができた。
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