抗血小板血栓剤の開発を目的とした血小板粘着反応の分子機作の解析

1992 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 03670505
• 研究機関: 奈良県立医科大学
• 研究代表者: 藤村 吉博 奈良県立医科大学, 医学部, 助教授 (80118033)
• キーワード: フオン ビルブランド因子 / GPIb / GPIIb / IIIa / リストセチン / ボトロセチン / ボトロンビン / 血小板粘着反応

研究概要

in vitroに於て血小板粘着反応のモデル実験は血漿von Wilrebrad因子(VWF)w血小板膜糖蛋白(GP)Ibの結合反応にて再現されるが、この反応を促進するには抗生物質リストセムンまたは蛇毒ボトロセチンのような非生理的物質の介在を必要とする。私はボトロセチン蛋白の精製と構造解析を行った(Biochemistry 30・1957-1964,1991,及びProc Natl Acad Sci USA 90:928-932,1993)。またこれらinducerによるVWF-GPIb結合反応を特異的に阻害する抗VWFモノクロナール抗体(NMC-4)のエピトープを280のアミノ酸配列までに限局した(Blood77:113-120,1991).この後,NMC-4はVWF-ボトロセチン複合体の形成を阻害すること(thrombos is e Hemestasis68:464-469,1992),また慶応大学医学部の池田康夫教授らが開発したshear-induced platilet aggregometerでもVWF-GPIb特異的血小板凝集が阻害されること(Cisculation 86:1859-1863,1992)が確認された。これらの結果を総合すると,NMC-4のもつこの普遍的なVWF-GPIb結合阻害作用はこの抗体がVWFのGPIr結合ドメインを形成する″Al-loop region″に強力に結合することにより,″key blocken″として仂き,もはやいかなるinducerによる刺激にてもこの部分のconformation変化を起こし得ず,GPIb結合ドメインとしての機能を発現し得ないものと推定される。
一方。最近VWF-GPIb結合阻害蛇毒のスクリーニングにてbothronbinと名づけたserine proteaseの発見・精製を行った(Biochemistry,submitted)。このbothronbinはGPIbに仂き,GPIIb/IIIaの活性化を促す事が示唆される所見が得られており,今後bothronbinの構造と機能推関を明かとすることはGPIb-GPIIb/IIIa間のsignal transduction経路を明らかにすることにつながると考えられる。

研究成果

• [文献書誌] Eri Yoshida et al.: "Alboaggregin B and Botrocetin,two snake venom proteins with highly homologous amino acid sequences but totallydistinct functions on von Willebrand factor binding to platelet" Biochemica Biophysics Reseurch Communication. (1993)
• [文献書誌] Taei Matsui et al.: "Human plasma α2-macroglobulin and uon Willebrand facter possess conalently-linked ABO(H)blood group antigens in subjects with corresponding ABO phenotypes" Blood. (1993)
• [文献書誌] Yoshiko Usami et al.: "Primary structure of two-chain botrocetir,a uon Willebrand factor modulator parified from the venon of Bothrops Jararac" Proceedings of National Acadeniy Science,USA. 90. 928-932 (1993)
• [文献書誌] Shinya Goto et al.: "Epinephrine augments von Willebrand facter dependent Shen-induced platelet aggregation" Circulation. 86. 1859-1863 (1992)
• [文献書誌] Yoshihiro Fujimura et al.: "The interaction of botrocetin with normal or variant von Willebrand factor (types IIA and IIB)and its inhibition by monoclonal antibodies that block receptor binding" Thrombosis and Haemostasis. 68. 464-469 (1992)
• [文献書誌] Kenji Nishio et al.: "Anti-platelet glycoprotein Ib monoclonal anti body (OP-F1) tolally abolisaes ristocetin-induced von Willebrand facter binding,but has mininal effect on the botrocetir-induced binding" Haemostasis. 21. 353-359 (1991)
• [文献書誌] Yoshihiro Fujimura and Koiti Titani: "Structure and function of von Willebrand factor-Hemostasir and Thronbosis(ed by A.L.Bloom et al)" Churchill-Livington(London), in press (1993)
• [文献書誌] 藤村 吉博,千谷 晃一: "von Willebrand 因子とその受容体" 宇宙堂 八木書店, 10 (1993)