アミロイド前駆体蛋白の分解過程に関する分子生物学的研究

1992 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 03670568
• 研究機関: 札幌医科大学
• 研究代表者: 高畑 直彦 札幌医科大学, 医学部, 教授 (20000987)
• 研究分担者: 藤井 充 札幌医科大学, 医学部, 助手 (80199299) ; 深津 亮 札幌医科大学, 医学部, 助教授 (10113614)
• キーワード: アルツハイマー病 / アミロイド前駆体蛋白 / アミロイド / 血小板

研究概要

アルツハイマー病脳には特有のアミロイド沈着構造物が見いだされる。アミロイド前駆体蛋白(APP)がどのような分解をうけてアミロイドとして沈着するのかを明らかにするために次のような実験を行った。
1)APPの各ドメインに対するモノクローナル抗体の樹立;APPの種々の部分に対するモノクローナル抗体(mcAb)を樹立してきたが、これまでに得られなかったN末端、KPIドメイン、C末端部分、β蛋白9-25部分に対するmcAb'sの作製を試みた。APPのアミノ酸配列に従って上記の合成ペプチドを作製し幾つかの方法で蛋白と架橋させマウスを免疫した。このうちN末端とC末端部分に対する高力価のmcAbを樹立することができた。KPI部分とβ蛋白9-25については多クローン抗体を作製した。これによりAPPに対する有用な抗体のパネルができた。
2)血小板におけるAPP関連物質の検討;血小板をトロンビンで刺激するとAPPを分泌する。この分泌型APPは抗N末端抗体、抗A2抗体とは反応し抗β抗体、ならびに抗C末端抗体とは反応しないことが確認された。興味あることは、トロンビン刺激後の血小板のホモジナートには抗β9-25、C末端抗体と反応を示す分子量の小さなAPPの断片があるらしいことである。この断片はAPPの分泌過程に伴う分解産物であるのか、あるいはAPPには別の代謝経路があることを示唆していると考えられる。しかし、細胞のホモジネートを用いてウエスタン・ブロットを行うと非特異的反応が生じることがあるため特異性について更に検討している。
3)ヒト脳、髄液のAPP関連物質の検討;これまでに樹立したアミロイドに対するmcAbのエピトープを解析したところ、Apo E、SP-40、40を認識する抗体があることが明かになった。この抗体を用いて体液中のApo E、SP-40、40の定量が可能となり診断的価値について検討している。
4)APPのcDNAサブクローンの作製;制限酵素をもちいたり、PCR法を応用してサブクローンの作製を続けている。

研究成果

• [文献書誌] 高丸 勇司: "老人斑アミロイドに存在する80kDa抗原の解析" 北海道医学雑誌. 68. (1993)
• [文献書誌] Y.Takamaru: "Novel protein component of SP-40,40 exists in senile plaque amyloid." Neurobiol Aging. 13. S34-35 (1992)
• [文献書誌] R.Fukatsu: "Membranous lipodystrophy(NASU-HAKOLA DISESASE)with Alzheimer's senile change." Neurobiol Aging. 13. S24- (1992)
• [文献書誌] R.Fukatsu: "Alzheimer病へのモノクローナル抗体によるアプローチ-原線維変化,老人斑の免疫病理を中心に-" 精神経誌. 91. 751-760 (1990)
• [文献書誌] R.Fukatsu: "Alzheimer病とモノクローナル抗体" 老年期痴呆研究会誌. 3. 1-8 (1989)
• [文献書誌] Y.Aizawa: "Monoclonal antibodies against senile amyloid in Alzheimer's disease.in Basic,Clinical,and Therapeutic Aspects of Alzheimer's and Parkinson's diseases;Vol1" Plenum Press, (1990)
• [文献書誌] Y.Takamaru: "Monoclonal antibodies against paired helical filament in Alzheimer's disease and Parkinsonism-dementia complex on Guam.in Basic,Clinical,and Therapeutic Aspects of Alzheimer's and Parkinson's diseases;Vol1" Plenum Press, (1990)