| 研究課題/領域番号 |
03670788
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| 研究機関 | 広島大学 |
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研究代表者 |
岡本 悦治 広島大学, 医学部, 助教授 (00144824)
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| 研究分担者 |
松田 博 県立広島病院, 医師 (50144465)
上田 克憲 広島大学, 医学部, 助手 (80176586)
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| キーワード | トリソミー / RFLP / 染色体異常 / DNA多型 / DNAプローベ |
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| 研究概要 |
トリソミーのうち21‐トリソミーについて過剰染色体の起源を同定するためJapanese Cancer Research Resoures Bank(JCRB)‐Geneより21番染色体上にあるrestriction fragment length polymorhism(RFLP)マーカーとして(1)D21S16 (2)D21S17 (3)D21S113(4)D21S15 (5)D21S19 (6)D21S82の6種類のプローベの供給を受けコンピテント細胞を増殖させ、プラスミドよりプローベDNAを回収した。
分析に際して、抽出したDNAを制限酵素にて切断し、アガロースゲル電気泳動の後、ゲルからナイロンメンブランへと、ペーパータオル法によるサザントランスファーを行った。ブロッティングの終了したナイロンメンブランに対し、前述のRFLPマーカーをnon‐radioactiveなdigoxigeninで標識し、ハイブリダイゼーションを行い、ELISA法による発色反応により検出した。
以上の研究と平行してヒト未受精卵の21番染色体の異常率を検索した。染色体標本の作製は美甘・上口の漸進固定空気乾燥法により行い、分析可能であった。148卵中(異常卵は32卵(21.6%)でこのうちG群の過剰であった例は1卵のみで、G群の異常率0.68%と低率であった。
一方精子の21番染色体異常率を検索するため21/13番染色体α‐サテライトDNAプローベを用いてFluorescence in situ Hybridization(FISH)法を行った。精子検査所見が正常であった6例についてそれぞれ3000個カウントし、蛍光シグナルが3個認められた異常精子の率は0.71%で、21番染色体が過剰であった精子の率は0.36%であると推定された。
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