| 研究課題/領域番号 |
03670937
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| 研究機関 | 東京医科歯科大学 |
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研究代表者 |
岩城 博 東京医科歯科大学, 歯学部, 助手 (70107308)
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| 研究分担者 |
百瀬 文雄 東京医科歯科大学, 歯学部, 助手 (60157849)
大井田 新一郎 東京医科歯科大学, 歯学部, 助手 (10114745)
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| キーワード | Bone Morphogenetic Protein(BMP) / PCR法 / リコンビナントタンパク質 |
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| 研究概要 |
我々は昨年度までに、すでに報告されているヒトBMP-2/4とマウスBMP-6(Vgr-1)のcoding regionを参考に作製したオリゴヌクレオチドプライマーを用い、新生児マウス全組織より抽出したmRNAをもとに作製したcDNAをテンプレートにPCR(Polymerase Chain Reaction)法を行い、マウスBMP-2,BMP-6のcDNAをクローニングした。また、同様の方法で、ヒト骨肉腫細胞株MG63から得たcDNAをテンプレートとし、ヒトBMP-2のcDNAをクローニングした。
今年度は、これらのcDNAをプローブとして各種cDNAライブラリーのスクリーニングを行った。ヒト胎盤λgt11 cDNAライブラリーのスクリーニングにより得られたλファージクローンからインサートを切りだし、プラスミドベクターにサブクローニングし塩基配列を決定したところ、ヒトBMP-4の全長をコードするcDNAであることが明らかになった。また、ヒト肺小細胞癌(NCL-H69)λgt11 cDNAライブラリーからは、ヒトBMP-6のほぼ全長をコードするcDNAをクローニングすることができた。
さらに、骨形成因子としてのBMPの作用機序を検討するため、全長cDNAの得られたヒトBMP-4のリコンビナントタンパク質の作製を試みた。今回は2種類の大腸菌タンパク質発現ベクターにヒトBMP-4 cDNAを組み込み、βガラクトシダーゼ-ヒトBMP-4融合タンパク質およびグルタチオン-S-トランスフェラーゼ(GST)-ヒトBMP-4融合タンパク質を発現させることに成功した。これらの融合タンパク質の骨形成因子としての活性については現在検討中である。
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