| 研究概要 |
我々はヒトチミジル酸合成酵素(TS)遣伝子の5'上流域に結合し、ヒト前骨髄性白血病細胞(HLー60細胞)の分化に伴って変動する2つの蛋白質性内因子(NFーTS2,NFーTS3)をすでに見出している。
本研究においては、まず、それら2つの核内因子の細胞周期に伴う変動を調べたところ、NFーTS2がG_0期からG_1期への移行の過程で新たに出現することを見出した。続いて、これまでのメチレ-ション結合阻害実験に加えて、さらにTS cDNAの5'欠失DNA断片を利用したゲルシフトアッセイや合成DNA断片を利用したDNA一蛋白質複合体形成の競合実験を行い、その結果から、2つの核内因子のヒトTS遣伝子上の結合部位はいずれも翻訳開始コドンATGの近傍であることを確定した。それら因子の生化学的性質についても2、3調べた。
次に、これらの因子の機能を探るため、ヒトTS遣伝子のプロモ-タ-領域を含むが核内因子の結合部位を欠失させたDNA断片と、欠失させていない断片とを用いてCAT(クロラムフェニコ-ルアセチルトランスフェラ-ゼ)アッセイを行なった。その結果、NFーTS2は遣伝子発現に対し促進的に作用するのに対し、NFーTS3は抑制的に作用することが示唆された。現在、さらに詳細に検討中である。
次に、核内因子NFーTS2を比較的多量含むことを確認しているHeLa細胞から大量に核抽出液を調製し、その精製を試みた。先ず、その核抽出液を硫安分画したところ、非特異的なDNA結合蛋白質とNFーTS2とを分離することができた。ゲルろ過とイオン交換のクロマトグラフィ-による精製を試みたが、NFーTS2の結合活性を検出することは出来なかった。NFーTS2は複数の因子からなるか、あるいはかなり不安定な因子である可能性が高い。現在、DNAアフィニティクロマトグラフィ-による精製を検討している。
|
