lpr遺伝子導入リウマチ因子産生惹起各種マウスにおけるIgG糖鎖構造異常の解析

1991 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 03680155
• 研究機関: 藤田保健衛生大学
• 研究代表者: 水落 次男 藤田保健衛生大学, 医学部, 助教授 (90133149)
• 研究分担者: 浜子 二治 藤田保健衛生大学, 短期大学, 助手 (80180933)
• キーワード: 慢性関節リウマチ / 免疫グロブリンG / 自己免疫疾患モデル / 糖鎖リモデリング / リウマチ診断法 / MRLマウス

研究概要

リウマチ因子を産生しリウマチ様関節炎を発症する自己免疫疾患マウスMRL/lprの血清中IgGの糖鎖が慢性関節リウマチ患者の血清IgGの糖鎖と同様にガラクト-スを欠くという構造異常を起こしていることを、IgGの詳細な糖鎖構造解析によって我々はすでに明らかにしている。本研究では、詳細な糖鎖構造解析をせずに血清中のIgGにおけるガラクト-ス欠損糖鎖を高精度に検出する手法を開発し、これを用いて、lpr遺伝子リウマチ因子産生惹起マウスの血清中IgGにおける糖鎖異常現象を調べた。まず、我々が開発した糖鎖リモデリング技術を用いて、血清より調製したIgGから蛋白質部分を損なうことなくシアル酸とガラクト-スを除去した。このガラクト-ス欠損IgG(GLーIgG)のレクチンとの反応性を、GLーIgGを固相に不動化したプロテインAに結合させた後、種々のビオチン化レクチンとストレプトアビジンーペルオキシダ-ゼを用いて調べた。その結果、GLーIgGは元のIgGと比較してコンカナバリンA(ConA)などのマンノ-スに親和性を示すレクチンと非常に強く結合することが判明した。そこで、血清中のIgGを固相に不動化したプロテインAに結合させ、そのIgG糖鎖に対するConAの結合をペルオキシダ-ゼの活性を測定することでIgGの糖鎖異常を調べた。その結果、この手法が慢性関節リウマチ患者の血清中IgGのガラクト-ス欠損糖鎖を糖鎖構造解析をした場合と同様に高精度で検出できることを判明した。そこでこの手法を用いて、lpr遺伝子を導入したリウマチ因子を産生しリウマチ様関節炎を発症する自己免疫疾患MRL/lprマウス、リウマチ因子は産生するが疾患は発症しないlpr遺伝子を導入したC3H/lprマウス、リウマチ因子産生も疾患発症もしないそれらの対照マウスMRL/+およびC3H/+の血清中IgGの糖鎖を調べ、対照マウス以外での糖鎖異常を検出した。今後、この確認のためにC3Hマウスの検体数を増やすとともにC3HマウスIgGの糖鎖構造解析が必要であろう。

研究成果

• [文献書誌] Tsuguo Mizuochi: "Preparation of oligosaccharide probes(neoglycolipids)and their applicaion to elucidation of functional role of carbohy drate moiety of glycoproteins." Trens in Glycosci.and Glycotech.3. 435-437 (1991)
• [文献書誌] Taei Matsui: "β-Subunits of equine chorionic gonadotropin and lutenizing hormone with an identical amino acid sequence have different asporazine-linked oligosaccharide chains." Biochem.Biophys.Res.Commun.174. 940-945 (1991)
• [文献書誌] Masaya Ohta: "Structures of asparagine-linked oligosaccharides from hen egg-yolk antibody(IgY):Occurrence of unusual glucosylatd oligomannose type oligosaccharides in a mature glycoprotein." Glyconjugate J.8. 400-413 (1991)
• [文献書誌] Taei Matsui: "Carbohydrate analysis of human con Willebrand factor with horseradish peroxidase-conjugated lectins" Biochem.Biophys.Res.Commun.178. 1253-1259 (1991)
• [文献書誌] Taei Matsui: "Structures of the asparagine-linked oligosaccharide chains of human con Willebrand factor:occarrence of blood group A,B,and H(O)structures" J.Biol.Chem.267. (1992)
• [文献書誌] 水落 次男: "糖蛋白質糖鎖由来オリゴ糖プロ-ブライブラリ-を用いた尿路感染症患者由来大腸菌の糖鎖持異的付着性の検討" Bacterial Adherence研究. 4. 36-43 (1991)
• [文献書誌] 水落 次男: "HIV表面糖蛋白質糖鎖の役割" 実験医学増刊「ウイルス-レセプタ-からウイルス病まで」. 9. 80-87 (1991)
• [文献書誌] 水落 次男: "エイズウイルス感染と糖鎖" 蛋白質核酸酵素. (1992)
• [文献書誌] 水落 次男: "糖鎖生物学とHIV" MEDICAL Immunology. (1992)
• [文献書誌] 水落 次男: "エイズウイルス表面糖鎖の化学構造と感染機序" 日本臨床. (1992)
• [文献書誌] Tsuguo Mizuochi: "Methods in Molecular Biology" Humana Press, (1992)
• [文献書誌] 水落 次男: "糖鎖工学ーこれからの生命科学「糖鎖の脂質化工学」" 産業調査会事典出版センタ-, (1992)
• [文献書誌] 水落 次男: "生物薬科学実験講座「ネオグリコリピドの合成」" 広川書店, (1992)
• [文献書誌] 水落 次男: "最近のエイズ研究「エイズウイルスのエンベロ-プ糖蛋白質gp120の糖鎖構造とその生理的意義」" オンコロジア社, 73-78 (1991)