ヒト細胞の紫外線誘発プロテアーゼに関する研究

1992 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 03680179
• 研究機関: 千葉大学
• 研究代表者: 鈴木 信夫 千葉大学, 医学部, 助教授 (90111426)
• キーワード: プロテアーゼ / 突然変異 / ヒト細胞 / アンチパイン / DNA修復

研究概要

本研究は、培養ヒト細胞において対紫外線応答の初期の過程で活性化するプロテアーゼの分離・抽出・精製を目指している。この活性化を見い出したきっかけは、インターフェロン処理後の細胞を紫外線で照射するとDNA修復レベルの増大と形質突然変異頻度の低下とが連動しておこることの観察である。しかし、この観察方法では、目的のプロテアーゼを大量に得ることは不可能であった。そこで、昨年は、インターフェロン処理なしでもプロテアーゼ活性が検出される変異株の樹立を主として行なった。今回は、まず、その変異株の産生するプロテアーゼが、目的とするプロテアーゼであることを検証した。その為には、紫外線により活性化されるプロテアーゼが、プロテアーゼ阻害剤であるアンチパインにより強く阻害される特性を利用した。即ち、変異株の形質突然変異頻度は低く複製後DNA修復レベルは高いが、このようなエラーフリー型形質は紫外線照射直後のアンチパイン処理により解除された。次に、既知のプロテアーゼとの異同を観察した。アンチパインを含め種々のプロテアーゼ阻害剤感受性は、プラスミノゲンアクチベーターとは著しく相違していた。従って、ウロキナーゼや組織型プラスミノゲンアクチベーターの可能性は低いと確認した。最後に、変異株よりプロテアーゼを抽出する方法を種々試みた。その結果、安定な粗酵素標品を得るには、超音波処理のような物理的方法は不適当であり、界面活性剤を用いる化学的方法が良いとの結論が得られた。
従って、変異株の大量培養法あるいは粗酵素標品の部分精製法の確立等、今後検討すべき課題は多々あるが、目的のプロテアーゼを得るおおよその目処はついたと考えられる。

研究成果

• [文献書誌] Suzuki,N.,Oiwa,Y.,Sugano,I.,Inaba,N.,Sekiya,S.,Fukazawa,I.,Yoshida,J.,Takakubo,Y.,Isogai,E.,Saito-Ebihara,M.: "Dipyridamole enhances an anti-proliferative effect of interferon in various types of human tumor cells" Int.J.Cancer. 51. 627-633 (1992)
• [文献書誌] Sugita,K.,Suzuki,N.,Isogai,E.,Niimi,H.: "Serum factors responsible for unusual induction of plasminogen activator activity in tuberous sclerosis" J.Nerol.Sci.108. 202-206 (1992)
• [文献書誌] Sugita,K.,Ishii,M.,Takanashi,J.,Suzuki,N.,Isogai,E.,Niimi,H.: "Pelizaeus-Merzbacher Disease:Cellular hypersensitivity to ultraviolet light" Brain Devel.14. 44-47 (1992)
• [文献書誌] Yoshino,H.,Inaba,N.,Fukazawa,I.,Okajima,Y.,Ota,Y.,Suzuki,N.,Takamizawa,H.: "A clinical and fundamental study on the correlation between serum concenfrations and tissue localization of cancer antigen 125(CA125)and tissue polypeptide antigen(TPA)in ouarian carcinoma" Chiba Med.J.68. 333-342 (1992)
• [文献書誌] 鈴木 信夫,齊藤 光江,高窪 義昭: "ストレスとサイトカイン" 病態生理. 11. 897-903 (1992)