| 研究概要 |
Serー52に結合した糖鎖の役割を調べる目的で、種々のグリコシダ-ゼを用いて、糖鎖をタンパク質分子から取り除くことを試みた。ウシIX因子から調製したペンタペプチドGluーSer(GlcーXylーXyl)ーAsnーProーaminoethylCysに対してαーキシロシダ-ゼ、βーキシロシダ-ゼ、Oーグリカナ-ゼを作用させたが、まったくオリゴ糖は切断されなかった。従って、生体内では、今までに精製されていない新しいグリコシダ-ゼにより代謝されている可能性が高い。次に大阪大学の楠本らと共同研究を行い、GlcーXyl,GlcーXylーXyl、SerーGlcーXyl、SerーGlcーXylーXylの合成に成功した。そこで、これらの糖鎖の外因系凝固反応におよぼす効果を調べた。リン脂質、Ca^<2+>、VII因子存在下、IXa因子によるX因子の活性化反応には、糖鎖はまったく影響しなかった。同様に、リン脂質、Ca^<2+>、組織因子存在下、VIIa因子によるX因子活性化反応に対しても糖鎖の影響は見られなかった。これらのことから、このオリゴ糖鎖が外因系凝固反応に直接関与している可能性が低いことが示された。しかし、グリコシダ-ゼによってVII因子、IX因子よりオリゴ糖を切断し、それらの機能解析をする必要がある。
以上の様に、種々のグリコシダ-ゼを用いて、タンパク質分子から糖鎖を取り除くことを試みたが、現在市販の酵素はまったく作用しなかった。そこで、GlcーXyl、GlcーXylーXylなどの糖鎖の化学合成を行い、外因系凝固反応に対する効果を調べた。その結果、これら糖鎖は外因系凝固反応には直接作用しないことが示唆された。しかし、この糖鎖が外因系凝固因子の代謝や生合成の制御に関与していることも考えられる。最近、業者を通してウサギ肝臓の入手が可能となったため、化学合成した糖鎖を利用して新しいグリコシダ-ゼおよび糖鎖の生合成に関与するグリコシルトランスフェラ-ゼの精製を進めたい。
|
