1992 年度実績報告書

横紋筋細胞内膜系の三次元画像解析

研究課題

研究課題/領域番号	04044034
研究機関	群馬大学
研究代表者	石川春律群馬大学, 医学部, 教授 (90010058)
研究分担者	L D Peachey ペンシルバニア大学, 生物学教室, 教授藤巻昇群馬大学, 医学部, 講師 (10008261)
キーワード	三次元画像解析 / 横紋筋細胞 / 横細管系 / 電子顕微鏡 / 共焦点レーザー顕微鏡 / 光顕・電顕相関法 / 筋原線維 / 膜オルガネラ
研究概要	1.三次元画像解析法の開発骨格筋細胞横細管系の三次元画像解析のための試料作製を行なった。カエル骨格筋を材料とし、ゴルジ法により銀染色を試み、横細管系を選択的に染色することができた。この方法では、すべての筋細胞が同じように染色されるわけではなく、横細管のみが選択的に染まった細胞のほかに、筋小胞体が染まった細胞、膜系が全く染まらない細胞も混在していた。興味深いことに、膜系の染色性の違いが光学顕微鏡下でも同定できた。横細管のみが染った細胞は透明に見え、筋小胞体染色の細胞は赤味を帯び、全く染まっていない細胞は黒色を呈した。このような試料から1〜3μmの厚い切片を作製、中高圧電子顕微鏡にて立体的写真を撮影した。これにより、当初の計画通り、三次元画像解析のための立体電子顕微鏡写真の一部の準備することができた。また、ゴルジ法で染色した筋細胞を樹脂包埋ののち、共焦点レーザー顕微鏡にて反射モードで立体的観察を試みた。その結果、横細管系の立体的配置の全体像を鮮明に可視化することに成功した。今後、これゆよる立体配置と機能との相関を明らかにしていきたい。 2.光顕・電顕相関法の開発培養ニワトリ心筋細胞を用いて、筋原線維形成過程および関連した膜オルガネラの動態を光顕と電顕とを相関させて分析することを試みた。金製グリッドに支持膜を張り、その上にニワトリ胚心筋細胞を培養し、筋原線維に関してはアクチン.ビンキュリンなどを蛍光染色し、膜オルガネラについてはDiOC_6,DiIなどの蛍光色素で染色した。この試料を共焦点レーザー顕微鏡で立体的に観察したのち、固定、臨界点乾燥を施し、全載標本として同一細胞について光顕・電顕相関観察を行うことができた。

研究成果
(8件)

すべてその他

すべて文献書誌 (8件)

[文献書誌] MASUDA,T.: "Confocal laser microscopy of dystrophin localization in guinea pig skeletal muscle fibers." J.Cell Biol.119. 543-548 (1992)
[文献書誌] MURAKAMI,T.: "Confocal interference microscopy of cultured cells." Bioimages. 1. 1-10 (1993)
[文献書誌] NAKAZAWA,E.: "The association of microtubules with the plasmalemma in epidermal tendon cells of the river crab." Biol.Cell. 75. 111-119 (1992)
[文献書誌] TOMITA,M.: "Identification of novel adhesion proteins in mouse peritoneal macrophages." Biol.Cell. 76. 103-109 (1992)
[文献書誌] ONO,M.: "Association of the actin cytoskeleton with glass-adherent proteins in mouse peritoneal macrophages." Biol.Cell. 77. IN PRESS (1993)
[文献書誌] FUJIMAKI,N.: "Light microscopic identification of Golgi staining patterns in embedded blocks of muscle tissues prior to sectioning for electron microscopy" Proc.51st Annu.Meet.Microsc.Soc.Amer.IN PRESS (1993)
[文献書誌] 石川春律(分担): "組識細胞化学1992" 日本組識細胞化学会, 174 (1992)
[文献書誌] 村上徹(分担): "細胞生物学1992" 中外医学社, 335 (1992)

1992 年度 実績報告書

横紋筋細胞内膜系の三次元画像解析

研究代表者

石川 春律 群馬大学, 医学部, 教授 (90010058)

研究成果

[文献書誌] MASUDA,T.: "Confocal laser microscopy of dystrophin localization in guinea pig skeletal muscle fibers." J.Cell Biol.119. 543-548 (1992)

[文献書誌] MURAKAMI,T.: "Confocal interference microscopy of cultured cells." Bioimages. 1. 1-10 (1993)

[文献書誌] NAKAZAWA,E.: "The association of microtubules with the plasmalemma in epidermal tendon cells of the river crab." Biol.Cell. 75. 111-119 (1992)

[文献書誌] TOMITA,M.: "Identification of novel adhesion proteins in mouse peritoneal macrophages." Biol.Cell. 76. 103-109 (1992)

[文献書誌] ONO,M.: "Association of the actin cytoskeleton with glass-adherent proteins in mouse peritoneal macrophages." Biol.Cell. 77. IN PRESS (1993)

[文献書誌] FUJIMAKI,N.: "Light microscopic identification of Golgi staining patterns in embedded blocks of muscle tissues prior to sectioning for electron microscopy" Proc.51st Annu.Meet.Microsc.Soc.Amer.IN PRESS (1993)

[文献書誌] 石川 春律(分担): "組識細胞化学1992" 日本組識細胞化学会, 174 (1992)

[文献書誌] 村上 徹(分担): "細胞生物学1992" 中外医学社, 335 (1992)

1992 年度実績報告書

石川春律群馬大学, 医学部, 教授 (90010058)

[文献書誌] 石川春律(分担): "組識細胞化学1992" 日本組識細胞化学会, 174 (1992)

[文献書誌] 村上徹(分担): "細胞生物学1992" 中外医学社, 335 (1992)