ハウスキーピング遺伝子の転写制抑-Na、K-ATPaseα1サブユニット遺伝子の発現調節

1992 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 04044142
• 研究機関: 自治医科大学
• 研究代表者: 川上 潔 自治医科大学, 医学部, 助教授 (10161283)
• 研究分担者: 鈴木 由利子 自治医科大学, 医学部, 講師 (50211610)
• キーワード: Na、K-ATPase / 転写制御因子 / コアプロモーター / 試験管内転写系 / DNaseIフットプリント法 / メチル化干渉法 / イニシエーター

研究概要

Na、K-ATPα1サブユニット遺伝子(ATP|A|)の上流域の転写制抑エレメントAREに結合する蛋白質のcDNA(HEB及びAREBG)をサウスウェスタン法でクローニングし、結合領域の解析を大腸菌で発現させたHEB及びAREBG蛋白質を用いて行った。またATP|A|への転写に対する影響を共形転換系を用いて検討した。その結果、培養細胞株の種類によって、HEB及びAREBGが転写促進する場合と転写抑制する場合とがあることがわかった。
またAREに結合しゲルシフト法でC1、C2、C3、複合体を形成する因子のうちC3を形成する蛋白質の精製を行った。HeLa細胞核抽出液をP11カラムで分画し、さらに、WGA-アガロースカラムと特異的オリゴヌクレオチドカラムにかけ100kdaと50kdaの2本のバンドにまで精製を行った。DNA結合活性は100kda蛋白質が担っている。また転写に対する効果を試験管内転写系を用いて検討したところ約2-3倍の転写促進効果がみとめられた。本因子にはチューブリンが含まれていたが、現在のところ転写に対する機能への関与は認められていない。
ATP|A|のコアプロモーターの解析について、TATAボックス付近から+30付近までの領域に複数のリンカー置換変異を導入し、試験管内転写系を用いて転写におよぼす影響を検討した。その結果、TATAボックス及び-2から+8の領域置換を導入すると、正しい転写開始点からの転写が阻害された。このことはTATAボックスと転写開始点付近の2ヶ所にイニシエーターが存在することを示唆する。これらに

研究成果

• [文献書誌] Kawakami,K.Suzuki-Yagawa,Y.,Watanabe,Y.and Nagano,K.: ""ldentification and characterization of the cis-elements regulating the rat AMRE(Adhesion Molecule on Glia)"" J.Biochem.111. 515-522 (1992)
• [文献書誌] Suzuki-Yagawa,Y.,Kawakami,K.and Nagano,K.: ""Housekeeping Na,K-ATPaseα1 subunit gene promoter is composed of multiple cis-elements to which common and cell type specific factors bind."" Molec.Cell Biol.12. 4046-4055 (1992)
• [文献書誌] Kamitani,T.,Ikeda,A.,Yamamoto,K.,Hara,Y.,Kojima,T.,Medford,R.M.and Shimda,K.: ""Regulation of Na,K-ATPase gene expression by thyroid hormone in rat cardiocytes."" Circulation Res.71. 1457-1464 (1992)
• [文献書誌] Kawakami,K.,Watanabe,Y.,Araki,M.,and Nagano,K.: ""Spl binds to the Adhesion Molecule on Glia regulatory element that functions as a positive transcription regulatory element in astrocytes."" J.Neurosci.Res.(1993)