エキドトキシン・ショックにける血液接触活性化機構の役割(基礎的・臨床的意義)

1994 年度 研究成果報告書概要

• 研究課題/領域番号: 04045053
• 研究種目: 国際学術研究
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 大学協力
• 研究機関: 湊川女子短期大学
• 研究代表者: 岡本 彰祐 湊川女子短期大学, 学長兼教授 (20030801)
• 研究分担者: IR.W.REDI Ar ウダヤナ大学, 畜産学部・食品細菌, 助教授 ; I Gusti Waya ウダヤナ大学, 医学部・細菌, 講師 ; I Gusti Ngur ウダヤナ大学, 医学部・細菌, 助教授 ; SOETJINIAGSI ウダヤナ大学, 医学部・小児科, 教授 小児栄養部長 ; NYOMAN Sutaw ウダヤナ大学, 学長兼教授 ; 岡本 進 湊川女子短大, 家政学科・生活文化, 助教授 (70152345) ; 虫明 清子 湊川女子短大, 家政学科・栄養, 助教授 (70149681) ; 日下郡 恵子 湊川女子短大, 家政学科・栄養, 教授 (40158100) ; 児島 正巳 湊川女子短大, 家政学科・養護, 教授 (90149667) ; IR W.Redi Aryanta Udayana University, Faculty of Animal Science, Food Bacteridogy, Associate Profe ; I Gusti Ngurah Suyasa Udayana University, Faculty of Medicine, Bacteriology, Associate Professor
• 研究期間 (年度): 1992 – 1994
• キーワード: エンドトキシン / リムルステスト / カブトガニ / チフス / 大腸菌 / エラジン酸 / プラズマカリクレイン / キニノーゲン

研究概要

本研究課題について、ここ3年間に行った調査・研究成果を概要する。
1.エンドトキシンと各種感染症病態との関連:ウダヤナ大学附属病院に各種感染症で入院中の患者を対象に、血漿中のエンドトキシンを合成基質法によるリムルステストにより測定し、エンドトキシンと病態との関連を追究した。
(1).チフス患者について病態経過に伴う血液中の菌の検出、ウィダール反応、エンドトキシンの定着等を行い、これらの相関を究明しようと試みたが、明らかな結論を得るに至らなかった。(2).テング出血熱の患児中には血中エンドトキシン量の多い例があり、クラム陰性菌との重感染、または炎症による腸管内エンドトキシンの血中への移行の可能性が示唆された。(3).明らかな下痢症の患者で高濃度のエンドトキシン量を示した症例があり、今後の課題として興味が持たれた。(4).一部の検体でリムルステストにおけるエンドトキシン非特異的反応で深在性真菌症を合併していると考えられる症例が認められた。
2.接触因子系におよぼすエンドトキシンの影響とそのメカニズム解析へのアプローチ:エンドトキシンと同様に接触因子活性化物質の1つであるエラジン酸をモルモット(ヒトと類似した血液キニン系を有する)に静注し、(1).著しい血圧の低下(2).キニン系のパシメーター(高分子キニノーゲン、血漿プレカリクレイン)の減少(3).プラスミン活性(ユ-クロプリン分画中のS-2251分解活性およびフィフリン分解活性)の上昇(4).凝固系因子のパラメーター(フィフリノーゲン鎖および血小板数)の減少(5).白血球数の減少を認めた。
尚このようなエラジン酸の作用によって惹起される血圧低下は、私共の開発した血漿カリクレインを選択的に阻害する合成インヒビター(PKSI-527)により、また凝固系因子パラメーターの減少はトロンビンインヒビター(アルガトロバン)によて、それぞれ効果的に抑制されることが認められた。さらにまた血漿カリクレインをPKSI-527を応用したアフィニティクロマトグラフィにより、ヒト血漿から分画抽出し、これをモルモットに静注し、上述のエラジン酸の場合とほぼ同様に(1).血圧低下(この血圧低下はアンジオテンシン変換酵素阻害剤カプトプリルによって強増され、PKSI-527の持続投与により改善された。)(2).キニン系パラメーターの減少傾向(3).プラスミン活性の上昇(4).白血球数の減少が認められた。
以上ここで得られた実験成績から接触因子系の活性化は、凝固・線溶・キニン系の活性化および血圧低下を来すものと結論された。また、血漿カリクレインはキニン系を介して血圧低下に関与し、さらにプラスミンの活性化および白血球の遊走に関与するものと考えられた。今後これらの点についてさらに詳細な検討を重ねる予定である。
3.食品から分離した各種のクラム陰性菌の生菌数とエンドトキシンとの関連:エンドトキシンの菌体からの遊離には菌種間で差異のあることが認められた。また、大腸菌と乳酸菌(アシドフィルス菌)を混合培養し、培養課程におけるエンドトキシンの変動を調べたところ、乳酸菌を介在することにより大腸菌からのエンドトキシンの遊離が強くなることが観察された。かかる乳酸菌は、一方では合成量質発色法によるリムルステストによるエンドトキシンの検出を著しく抑制する作用を有することが認められた。さらに詳細な検討を行いつつある。
4.インドネシアにおけるカブトガニ棲息の実態とカブトガニの血球ライゼ-トのリムルステストへの応用:エンドトキシンの定量用試薬としての実用化を図るため、現地での製造の可能性について現地製薬業者、研究関係者らと協議、検討中である。
5.ウダヤナ大学の協力研究者に血漿カリクレイン、血漿カリクレインインヒビター、高分子キニノーゲン、ブラジキニン等の定量法をマスターするためのトレーニングを行った。そしてウダヤナ大学においても正確な定量ができるか否かについて検討し、定量が可能なことを確認した。
6.研究関連フォーラム並びにミーティングを数回に亘って行った。

研究成果

• [文献書誌] 和中 敬子: "変形性関節症患者の関節液中のトロンビン活性" 炎症. 12. 77-78 (1992)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] A.Hijikata-Okunomiya: "A strategy for rational approach to designing synthetic selective inhibitors." SEMINARS IN THROMBOSIS AND HEMOSTASIS. 18. 135-149 (1992)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Takefumi Matsuno: "Clinicalc application of the synthetic thrombin inhibitor,Argatroban(MD-805)" SEMINARS IN THROMBOSIS AND HEMOSTASIS. 18. 155-160 (1992)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Keiko Wanaka: "Synthesis of trans-4-aminomethylcyclohexanecarbony1-L-and-D-phenylalanine-4-carboxymethylanilide and examination of their inhibitory activity against plasma kallikrein" Chem.Pharm.Bull.40. 1814-1817 (1992)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Naoki Teno: "Development of active center-directed plasmin and plasma kallikrein inhibitors and studies on the structure-inhibitory activity relationship" Chem.Pharm.Bull.41. 1079-1090 (1993)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Y.Fujimori: "Effects of a highly selective plasma kallikrein inhibitor on collaagen-induced arthritis in mice." Agents Actions. 39. 42-48 (1993)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Masami Kojima: "A study on the relationship of cell populations and endotoxin in cultivation of gram negative bacteria-Comparison among species-" 湊川女子短期大学紀要. 26. 133-135 (1993)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Shosuke Okamoto: "A highly selective synthetic inhibitor of plasma kallikrein" 湊川女子短期大学紀要. 26. 136-141 (1993)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Masami Kojima: "Effects of lactic acid bacteria on the detection of endotoxin" 湊川女子短期大学紀要. 27. 185-189 (1994)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] 岡本 彰祐: "個別的統御による「凝固・線溶・キニン系」研究の新しい断面-特異的阻害物質研究の50年-" 日本脈管学会誌. (in press). (1995)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Masami Kojima: "A study on guantitative chage of endotoxin during the mixed culture of Escherichia coli and Lactobacillus acidophilus" 湊川女子短期大学紀要. 28(in press). (1995)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Masami Kojima: "Relationship between endotoxin and symptom in some infectious diseases" 湊川女子短期大学紀要. 28(in press). (1995)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] H.Fritz: "Agents and Actions,Suplement(Recent Progress on Kinins),(Vol.38)" Birkhauser Verlag(Basel), 663 (1992)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] G.Claeson: "The Design of Synthetic Inhibitors of Thrombin" Plenum Press(New York), (1993)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] L.Lorand: "Methods Enzymology(Vol.222)Part A" Academic Press,Inc.(San Diego,Nwe York,Boston,London,Sydney,Tokyo,Toronto), 613 (1993)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Keiko Wanaka: "Thrombin in synovial fluids with osteoarthritis patients. (in Japanese)" JAPANESE JOURNAL OF INFLAMMATION. 12. 77-78 (1992)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] A.Hijikata-Okunomiya: "A strategy for rational approach to design synthetic selective inhibitors." SEMINARS IN THROMBOSIS AND HEMOSTASIS. 18. 135-149 (1992)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Takefumi Matsuno: "Clinical application of the synthetic thrombin inhibitor, Argatroban (MD-805)" SEMINARS IN THROMBOSIS AND HEMOSTASIS. 18. 155-160 (1992)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Keiko Wanaka: "Synthesis of trans-4-aminomethylcyclohexanecarbony1-L-and-D-phenylalanine-4-carboxymethylanilide and examination of their inhibitory activity against plasma kallikrein" Chem.Pharm.Bull.40. 1814-1817 (1992)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Naoki Teno: "Development of active center-directed plasmin and plasma kallikrein inhibitors and studies on the structure-inhibitory activity relationship" Chem.Pharm.Bull.41. 1079-1090 (1993)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Y.Fujimori: "Effects of a highly selective plasma kallikrein inhibitor on collageninduced arthritis in mice." Agents Actions. 39. 42-48 (1993)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Masami Kojima: "A study on the relationship of cell populations and endotoxin in cultivatio of gram negative bacteria-Comparison among species-" Minatogawa Joshi Tanki Daigaku Kiyo. 26. 136-141 (1993)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Shosuke Okamoto: "A highly selective synthetic inhibitor of plasma kallikrein" Minatogawa Joshi Tanki Daigaku Kiyo. 26. 136-141 (1993)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Masami, Kojima: "Effects of lactic acid bacteria on the detection of endotoxin" Minatogawa Joshi Tanki Daigaku Kiyo. 27. 185-189 (1994)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Shosuke, Okamoto: "New Aspects of Interinfluences of Coagulation, Fibrinolysis and Kinins : Fifty Years of Experience of Creating Synthetic Selective Infibitors of those Enzymes Concerned. (in Japanese) (in press)" THE JOURNAL OF JAPANESE COLLEGE OF ANGIOLOGY. (1995)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Masami Kojima: "A study on guantitative chage of endotoxin during the mixed culture of Escherichia coli and Lactobacillus acidophilus (in press)" Minatogawa Joshi Tanki Daigaku Kiyo. 28. (1995)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Masami Kojima: "Relationship between endotoxin and symptom in some infectious diseases (in press)" Minatogawa Joshi Tanki Daigaku Kiyo. 28. (1995)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] H.Fritz: Birkhauser Verlag (Basel). Agents and Actions, Suplement (Recent Progress on Kinins), (Vol.38), 198-205 (1992)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] G.Claeson: Plenum Press (New York). The Design of Synthetic Inhibitors of Thrombin, 119-180 (1993)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] L.Lorand: Academic Press, Inc. (San Diego, New York, Boston, London, Sydney, Tokyo, Toronto). Methods Enzymology (Vol.222) Part A, 328-340 (1993)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より