微繋蛋白質の末端配列決定法、特に新しい力ルポキシ末端配列の決定法の確立

1994 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 04102008
• 研究機関: 東京理科大学
• 研究代表者: 次田 晧 東京理科大学, 総合研究所, 教授 (00028284)
• 研究分担者: 加茂 正晴 東京理科大学, 総合研究所, 助手 (40214564)
• キーワード: C末端酸配分折 / N末端配列分析 / 不均一相微量反応 / 二次元電気泳鋤 / 過フッ素酸無水物 / 質量 分析

研究概要

1)酸無水物を用いるC末端アミノ酸配列決定法;バンタフロロプロビオン酸無水物、ヘブタフロロ酪酸無水物をべブチドに-20℃1時間反応させるとC末端から一つづつアミノ酸の外れた分解混合物を得る事を見出しだが、その際反応の再現性を空気中の湿気が阻害している事を実験的に見出し、全実験をグロープポックス中で乾燥窒素ガスを流し乍ら実験を行う事とした。又無水物のアセト二トリル溶液からの気相反応が水分の除去に貢献している事を見出した。この反応の機構の研究により中間生成物としてアルコールでヱステルを作るオキサゾロン又は混合酸無水物を見出した。又この反応における副生成物について主生成物より-1、-8-46の各質量イオンを主反応生成物の他に見出し、その各々を物質的に確認した。
2)N末端配列についてはエドマン分解の中間生成物のアミノ化には不均一相反応が微重反応に有効である事を見出し、その線にそったフミノ化高感度化の端緒を開いた。又ヒドラジンの脱ブロック反応を二次元電気泳勅で得られた60ヶのN末端ブロックの蛋白質に適用しその約1割のデプロツクに成功した。他のアセチルのデプロックの反応を見出しつつある。
3)二次元電気泳動ではイネの蛋白質に引き続き実験植物としてゲノム検索の始められているシロイヌナズナについて行い5組織の蛋白質について合計約5,000ヶの蛋白質を分離し、内約100ヶの蛋白質の配列分析を進め約60ヶの蛋白部分構造を得た。続いてフザリウム菌についても同様の研究を進め1,500ヶの蛋白を分離、その約8%の蛋白質の解析を行った。

研究成果

• [文献書誌] H.Iwadate: "Amino acid segeunce of ferredoxin-thioredoxin reductass variable subunit" Eur.J.Biochem.223. 465-471 (1994)
• [文献書誌] M.Kamo: "Two dimensional electrophoresis of rice proteins" Workshop on Rice MoI.BioI.57- (1994)
• [文献書誌] M.Kamo: "Characterization of proteins from rice and Arabidopsis with two dimensional electrphoresis" Protein Engineering. 7. 1161-1162 (1994)
• [文献書誌] M.Kamo: "Separation and characterization of proteins with two-dimensional electrophoresis" J.Prot.Chem.13. 475-476 (1994)
• [文献書誌] M.Kamo: "Separation & characterization of plant proteins with two dimensional electrophoresis" rotein Science-. 31. 97- (1994)
• [文献書誌] N.Miyatake: "A specific chemical cleavage of asparaginyl and glycyl-glycine bonds in peptides and proteins by avapornhydrous hydrazine" J.Biochem.115. 208-212 (1994)
• [文献書誌] M.Miyazaki: "Identification as b-adducin of a protein interacting with raphilin-3A in the presence of Ca2+ and phosphatidglserine21GC07:Biochem.Biophys.Res.Commun." 205. 460-466 (1994)
• [文献書誌] Y.Nabuchi: "C-terminal sequencing of peptides and proteins by successive degradation with heptafluorobutylic anhydride vapor" Chem.Lett.757-760 (1994)
• [文献書誌] K.Takamoto: "An amino acid sequencing method using perfluoroacyl anhydride" Protein Engineering. 7. 1167 (1994)
• [文献書誌] A.Tsugita: "Two dimensional electrophoresis of rice proteins and novel C-terminal sequencing methods" The 23rd Seminar on Science and Technology. 91-100 (1994)
• [文献書誌] A.Tsugita: "Separation and characterization of plant proteins with two dimensional electrophoresis" Proc.Japan-ROC Symposium on Agricultural Biotech.3-5 (1994)
• [文献書誌] A.Tsugita: "Separation and characterization of plant proteins with two dimensional electrophoresis" Workshop on Rice MoI.BioI. 12-13 (1994)
• [文献書誌] A.Tsugita: "A novel C-terminal sequencing method using perfluoroacyl anhydrides" J.Protein Chem.13. 476-477 (1994)
• [文献書誌] A.Tsugita: "C-terminal sequencing method using perfluoroacyl anhydrides" Protein Science. 13. 78 (1994)
• [文献書誌] A.Tsugita: "Separation and characterization ofrice protein" Electrophoresis. 15. 708-720 (1994)
• [文献書誌] L.P.Chow: "Two dimensional polyacrylamide gel electrophoresis of Fusarium sporotrichioides proteins" J.Biomed.Sci.(発表予定).
• [文献書誌] K.Horimoto: "Protein superfamily database (PROSUP)" Proc.14th International CODATA Conference. (発表予定).
• [文献書誌] K.Horimoto: "A method for detecting an obscure sequence motif:application to DNA binding motifs" Prot.Eng.(発表予定).
• [文献書誌] M.Kamo: "Separation and characterization ofArabidopsis proteins by two-dimensional gel electrophoresis" Electrophoresis. (発表予定).
• [文献書誌] K.Takamoto: "Carboxy-terminal degradation of peptides using perfluoroacyl anhydrides a novel C-terminal seguencing method" Eur.J.Biochem.(発表予定).
• [文献書誌] A.Tsugita: "A C-terminal seguencing method using perfluoroacyl anhydrides vapor method in protein structure analysis" Plenum Pub.(発表予定).