HTLV-I Rexの細胞相同体cDNAのクローニング

1992 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 04152061
• 研究機関: 京都大学
• 研究代表者: 志田 壽利 京都大学, ウイルス研究所, 助教授 (00144395)
• キーワード: HTLV-I / Rex / 細胞相同体 / クローニング

研究概要

HTLV-IのRexは核や核小体に存在し、HTLV-I mRNAのスプライシングや核から細胞質への輸送の制御を行っている。RexのN末端に対する抗体で、Rexの感染していない細胞の核小体が染色されることから、Rexの相同体が存在することを予想した。
Rex相同体のcDNAをクローニングするために、この抗体をアフィニティー精製してから、λZapIIを用いたCV1細胞cDNAのライブラリーをスクリーニングした。80万個のプラークを調べたうち23個のポジティブなクローンを得た。
次に核小体への局在を調べるために、pSRαを改変したEukaryote expression vectorに上記クローンを全てsukloneした。CV-1細胞やHeLa細胞にトランスフェクション後、上記抗体を用いた蛍光抗体法によって調べたところ、1つのクローンが核小体を染めることを見い出した。このクローンの塩基配列を決定したところ、70Kda以上の蛋白質をコードしている不完全なcDNAであることがわかった。又RexのN末端とやや似たアミノ酸配列が2ヶ所見い出された。
Rexはcellular cofactorを共同して働いていると考えられている。そこで、Rexと機能的に関連していることを調べるために、Rexに対するTrans Dominant Inhibitionの性質を有するかどうか、23クローン全てについて調べた。その結果2クローンがRexの作用を昂進させた。現在、この現象を種々のレポーターを用して確認することを行っている。

研究成果

• [文献書誌] Tanaka,T.,Masuda,M.,Yoshida,A.,Shida,H.,Nyunoya,H.,Shimotohno,K.,& Tozawa,H.: "Antigenic structure of the transactivator protein encoded by human T-cell leukemia virus type-I (HTLV-I),as defined by a panel of monoclonal antibodies." AIDS Res.Human Retroviruses. 8. 227-235 (1992)
• [文献書誌] Taguchi,F.,Ikeda,T.,& Shida,H.: "Molecualr cloning and expression of a spike protein of neurovirulent murine corona virus JHMV variant c1-2." J.Gen.Virol.73. 1065-1072 (1992)
• [文献書誌] Kannagi,M.,Shida,H.,Igarashi,H.,Maruyama,I.,Hattori,T.,Osame,M.,Inoko,H.,& Harada,S.: "Target epitope in the tax protein of human T cell leukemia virus type I recognized by class I major histocompatibility complex-restricted cytotoxic T cell." J.Virol.66. 2928-2933 (1992)