1992 年度実績報告書

がん抑制遺伝子の発現クローニングと機能解析

研究課題

研究課題/領域番号	04152128
研究機関	(財)癌研究会
研究代表者	野田亮癌研究所, ウイルス腫瘍部, 部長 (30146708)
研究分担者	村田哲癌研究所, ウイルス腫瘍部, 研究員高井節夫癌研究所, ウイルス腫瘍部, 研究員 (40241236)
キーワード	Krev-1 / FISH / 染色体マッピング / tenascin / CDC24 / RSR1
研究概要	1)ヒトKrev-1遺伝子の大部分を含むDNA断片をクローニングし、そのexon-intron構造を明らかにした。また、Krev-1のpseudo-geneを一つ見いだし、その塩基配列を決定した。さらに、FISH法によりそれらの遺伝子の染色体マッピングを行ない、それぞれ1p13.3、14q24.3に位置するという結果を得た。 2)ヒトKrev-3遺伝子産物(tenascinのC-端側1/4に対応)はパン酵母CDC24蛋白質と弱い類似性を持つ。パン酵母ではCDC24やそのmulticopy suppressorであるRSR1(Krev-1とかなり強い類似性を持つ)は発芽部位の決定に関与しており、それらの遺伝子の変異は、rancom buddingを引き起こすことが知られている。そこで、ヒトKrev-3遺伝子を酵母細胞内で過剰発現させてみたところ、やはりrandom budding現象が観察された。 3)新しくデザインされたλファージ型発現ベクターを用いてヒト線維芽細胞(MRC-5)cDNAライブラリーを作成し、これをc-Ki-rasでトランスフォームしたNIH3T3細胞(DT株)にトランスフェクト後、培養シャーレへの接着性が増した4クローンの変異細胞(フラット・リバータント)を単離した。それらの細胞に組み込まれているトランスフォーメーション抑制遺伝子の候補cDNAを大腸菌に回収したところ、各々7,6,4,3,1.8kbの長さを持つ5種のcDNAが得られた。この内6kbのcDNAは独立に単離された複数のリバータントから回収された。単独のプラスミドをDT細胞にトランスフェクトしたところ、6kb及び1.8kbのcDNAにリバータント誘導活性が認められた。このうち6kbのcDNAについては、部分塩基配列を決定したが、今のところデータベース中に類似配列は見いだされていない。一方、1.8kbのcDNAはホメオボックスを持つ蛋白をコードしていることが分かった。担し、我々の得たcDNAは5'末端が一部欠落していると思われる。

研究成果
(6件)

すべてその他

すべて文献書誌 (6件)

[文献書誌] Caamano,J.,DiRado,M.,Iizasa,I.,Momiki,S.,Fernandes,E.,Ashendel,C.,Noda,M.& Klein Szanto,A.J.P.: "Partial suppression of tumorigenicity in human lung cancer cell line transfected with Krev-1." Mol.Carcinogenesis. 6. 252-259 (1992)
[文献書誌] Kumar,S.,Tomooka,Y.& Noda,M.: "Identification of a set of genes with developmentally down-regulated expression in the mouse brain." Biochem.Biophys.Res.Commun.185. 1155-1161 (1992)
[文献書誌] Yamamura,Y.,Kageyama,Y.,Matsuzaki,T.,Noda,M.& Ikawa,Y.: "Distinct downstream signaling mechanism between erythropoietin receptor and interleukin-2 receptor." EMBOJ.11. 4909-4915 (1992)
[文献書誌] Takai,S.,Nishino,N.,Kitayama,H.,Ikawa,Y.,& Noda,M.: "Mapping of the KREV1 transformation suppressor gene and its pseudogene(KREV1P)to human chromosome 1p13.3 and 14q24.3,respectively,by fluorescence in situ hybridization." Cytogenet.Cell Genet.
[文献書誌] Noda,M.: "Structures and Functions of the Krev-1 transformation suppressor gene and its relatives.(Review)" Biochim.Biophys.Acta.
[文献書誌] Noda,M.: "Mechanisms of reversion.(Review)" FASEBJ.

1992 年度 実績報告書

がん抑制遺伝子の発現クローニングと機能解析

研究代表者

野田 亮 癌研究所, ウイルス腫瘍部, 部長 (30146708)

研究成果

[文献書誌] Caamano,J.,DiRado,M.,Iizasa,I.,Momiki,S.,Fernandes,E.,Ashendel,C.,Noda,M.& Klein Szanto,A.J.P.: "Partial suppression of tumorigenicity in human lung cancer cell line transfected with Krev-1." Mol.Carcinogenesis. 6. 252-259 (1992)

[文献書誌] Kumar,S.,Tomooka,Y.& Noda,M.: "Identification of a set of genes with developmentally down-regulated expression in the mouse brain." Biochem.Biophys.Res.Commun.185. 1155-1161 (1992)

[文献書誌] Yamamura,Y.,Kageyama,Y.,Matsuzaki,T.,Noda,M.& Ikawa,Y.: "Distinct downstream signaling mechanism between erythropoietin receptor and interleukin-2 receptor." EMBOJ.11. 4909-4915 (1992)

[文献書誌] Takai,S.,Nishino,N.,Kitayama,H.,Ikawa,Y.,& Noda,M.: "Mapping of the KREV1 transformation suppressor gene and its pseudogene(KREV1P)to human chromosome 1p13.3 and 14q24.3,respectively,by fluorescence in situ hybridization." Cytogenet.Cell Genet.

[文献書誌] Noda,M.: "Structures and Functions of the Krev-1 transformation suppressor gene and its relatives.(Review)" Biochim.Biophys.Acta.

[文献書誌] Noda,M.: "Mechanisms of reversion.(Review)" FASEBJ.

1992 年度実績報告書

野田亮癌研究所, ウイルス腫瘍部, 部長 (30146708)