ヒト染色体ディセクションによる外骨腫(がん抑制)遺伝子単離と腫瘍抑制機構

1992 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 04253233
• 研究機関: 長崎大学
• 研究代表者: 新川 詔夫 長崎大学, 医学部, 教授 (00111170)
• 研究分担者: 陣野 吉廣 長崎大学, 医学部, 助手 (20179097)
• キーワード: 外骨腫症 / 原因遺伝子 / 逆行遺伝学 / FISH / マッピング / PFGE / BMP-1遺伝子

研究概要

1)8q23-q24領域特異的microcloneからsingle-copy配列だけを集めprobeとしたヒトcomid libraryのscreeningで20個の陽性cosmidsを取得した。
2)それら及び既に8q遠位1/3にmapされているcosmidを用いて、TRPSI型患者とII型患者のmappingをFISH法により行った。両者共1copyを示したのは2個で、前者で2copy後者で1copyの可能性を示したのはなかった。
3)一部は2色FISH法により、cosmidsの配列順序をcen-1185-1148-1435-1512-553-1122-1173-telのように決定した。
4)1のcomidを用い、t(8;13)転座外骨腫患者DNAにおけるPFGE解析を行った。1cloneは患者において800kbのBsshII-aberrant fragmentを検出したので、これは外骨腫患者の転座切断点から600kb以内に位置すると考えられる。このcloneに対応するYAC-subclones中で切断点を検出するものを同定し、更に切断点そのものを含むDNA断片を追う予定である。
5)ヒトBMP1-cDNA由来のPCR産物を用いて釣り上げたcomid cloneは、その制限酵素地図および一部の塩基配列からBMP1を包含していたが、それはFISHにより8p21にマップされた。この結果は、ヒトBMP1座は8p21であり外骨腫遺伝子ではないことを示す。

研究成果

• [文献書誌] Hirota T,Tsukamoto K,Deng H-X,et al.: "Microdissection of human cbromosomal regious 8q23.3q24.11 and 2q33-qter:Constyctin of DNA libratios and ciolation of their clones." Genomics. 13. 349-354 (1992)
• [文献書誌] Jimd Y,Harada N,Yoshiura K,et al.: "A simple and efficient amplification method of DNA with unkuown Sequeuces and its appication to the microdissechion-microcloning." Journsl of Biochemestry. 112. 75-80 (1992)
• [文献書誌] Kawano A,Mitranqura A,Dittrich B,et al.: "Molecular dissechan of the Prader-willi/Angelman rhuduome ergion(15-q11-13)by YAC clouing and FI8H analysis." Humen Molecular Geuetics. 1. 417-425 (1992)
• [文献書誌] Tsukancoto K, tohma T,Ohta T,et al.: "Cloning and characferization of the inverdion breakpomts of chiowcoome 2q35 in a palient with Waardenbwg synohome type I." Human Molecular Gemetics. 1. 315-317 (1992)
• [文献書誌] Yoshiwa K,Jinsuo Y,Niikawa N: "Assignment of human fone ncorphogenetic prstein 1 geme to 8p21:Exclusion as a candidste for bome dyoulasca in multiple eostoses." Catogenetics and cell Geuetics. (1993)