神経線維腫症1型(NFI)遺伝子及びその産物の機能解析

1992 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 04260205
• 研究機関: 神戸大学
• 研究代表者: 田中 一馬 神戸大学, 医学部, 助手 (60188290)
• 研究分担者: 東江 昭夫 東京大学, 理学部, 教授 (90029249)
• キーワード: ras p21 / 酵母 / 神経線維腫症1型 / IRA遺伝子 / GAP

研究概要

出芽酵母のRAS蛋白の負制御因子の一つIRA2蛋白は、ヒトNF1蛋白質と高い相同性を示す。この2種の蛋白質は、それらの活性部位と考えられるGAPドメインの外側まで相同領域が広がっている。ira変異株は熱ショックに高感受性を示すので、この性質を利用して、IRA2遺伝子およびNF1遺伝子の機能領域を解析することが可能である。本年度は、GAPドメイン以外の領域の機能について解析を試みた。
IRA2遺伝子について多種類の欠失プラスミドを構築し、ira2変異株に導入し、宿主菌の熱ショック感受性の回復を調べた。ほとんどGAPドメインだけを持つpKT16はira2変異をサプレスしたが、N末側を欠失させたpKT180(GAPドメインことC末側を持つ)はできなかった。また、C末側を欠失させたプラスミドpKF100(GAPドメインことN末側を持つ)はGAP活性を保持していた。pKT180と、N末部分だけを持ち、それ自身ではGAP活性を持たないプラスミドpKF84を同時にira2変異株に導入すると、ira2変異ガサプレスされた。上記の結果から、IRA蛋白のGAPドメインの外側はIRA蛋白の活性調節に関わること、また、その時、N末側が正に、C末側が負に働くことが予想される。GAPドメインを欠失したプラスミドpKF50は、ira2変異を相補できない。pKT180およびpKF50をそれぞれ野生株に導入すると、形質転換体は熱ショック感受性になった。この結果は、GAP活性を持たないIRA2変異型蛋白が正常なIRA2蛋白の活性を阻害するように働くことを示している。以上の結果から、IRA2蛋白とRAS蛋白の相互作用について考察した。

研究成果

• [文献書誌] Matsui,Y.: "Isolation and characterization of two novel ras superfamily genes in Saccharomyces cerevisiae." Gene. 114. 43-49 (1992)
• [文献書誌] Matsui,Y.: "The yeast RHO3 and PHO4 genes,ras superfamily genes,are necessary for bud growth and their defect is suppressed by high dose of bud-formation genes cdc42 and BEMI." Mol.Cell.Biol.12. 5690-5699 (1992)
• [文献書誌] Ono,B.: "Cloning and characterization of the Cy53(CYI1)gene of Saccharomyces cerevisiae." J.Bacteriol.174. 3339-3347 (1992)
• [文献書誌] Tanaka,D.: "A dominant activationg mutation in the effector region of RAS abolishes IRA2 sensitivity." Mol.Cell.Biol.12. 631-637 (1992)
• [文献書誌] Uesono,Y.: "Negative regulators of the PHO system of Saccharomyces cerevisiae:characterization of PHO80 and PHO85." Mol.Gen.Benet.231. 426-432 (1992)
• [文献書誌] Nisogi,H.: "A new essential gene of Saccharomyces cerevisiae,a defect in et may result in instability of nucleus." Exp.Cell Res.200. 48-57 (1992)