パラミクソウイルスのRNA Editingの分子機構

1992 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 04271205
• 研究機関: 三重大学
• 研究代表者: 伊藤 康彦 三重大学, 医学部, 教授 (00022872)
• キーワード: パラインフルエンザウイルス / P遺伝子 / V遺伝子 / RNA editing / バキュロウイルス

研究概要

ヒトパラインフルエンザウイルス-HPIV-2及びSV41-のP遺伝子に見い出されたRNA Editingの分子機構を解析する為に、ミニシストロンを構築した。このミニシストロンは両端にHPIV-2のリーダー配列(およびR1配列)とトレイラー配列、その中央にSV41のP遺伝子を組み込んであり、このcDNAをブルースクリプトIIベクターのT3プロモーターの下流に組み込みT3RNAポリメラーゼを用いてゲノムセンスRNA(VRNA)をオンオフ合成した。この合成RNAをHPIV-2感染HeLa細胞にtranfectして、20〜24時間後にこの細胞からRNAを分離精製し、リバースPCR法により、ゲノムセンスRNA(VRNA)あるいはmRNAセンスRNA(cRNA)の解析を行った。その結果,(1)R1配列を含むRNAの場合にはcRNAのみが検出され、SV41のP遺伝子がmRNAに転写されていることが示唆されたので、PCR産物をクローニングしてその塩基配列を調べたが、現在までのところ、edited RNAを検出できていない。(2)R1配列を含まないRNAの場合にはvRNAおよびcRNAの両センスのRNAが検出され、RNAのReplicationが起こっていることが示めされた。なおRNAを導入した細胞の上澄みを新たなHeLa細胞に接種したところ32代断代後の細胞内にもvRNAが検出されたので、P遺伝子のEncapsidationおよびPackagingが起こっていると考えられる。次にHPIV P遺伝子のcDNA(P蛋白をコードしている)をYM-1ベクターに組み込み、ReaeombinantのBaculo virusを作製して、P蛋白を発現させたところ、P蛋白とともにV蛋白も発現された。この機構を解析する為にmRNAを解析したところ、edited mRNAが見い出された。現在詳しい解析を行なっているところである。

研究成果

• [文献書誌] 河野 光雄,鶴留 雅人,沖 尚弘,西尾 真智子,駒田 洋,松村 治雄,草川 茂,太田 尚孝,伊藤 康彦: "Sequence determination of the P gene of simian virus 41:Presence of irregular deletions near the RNA-editing sites of Paramyxoviruses." Jcurual of General Virology.
• [文献書誌] 伊藤 康彦,駒田 洋,浅川 茂,鶴留 雅人,松村 治雄,河野 光雄,太田 尚孝,西尾 真智子: "Fusion regulation proteins on the cell surface:Isolation and characterization of monoclonal antibadies which engarce giant polykaryocy formation in NDV-intected cell lines of human origin" Journal of Virology. 66. 5999-6007 (1992)
• [文献書誌] 小川 昌弘,六鹿 典子,鶴留 雅人,河野 光雄,松村 治雄,草川 茂,駒田 洋,西尾 真智子,伊藤 康彦: "Nucleotide sequence analysis of the simian virus 41gene encoding the large(L)protein and construction of a phylogenetic tree for the L proteins of paramyxouiruses" Journol of General Virology. 73. 2743-2750 (1992)
• [文献書誌] 樋口 泰光,宮原 慶裕,河野 光雄,鶴留 雅人,松村 治雄,草川 茂,駒田 洋,西尾 真智子,伊藤 康彦: "Sequence analysis of the large(L)protein of simian virus5" Journal of Genaral Virology. 73. 1005-1010 (1992)
• [文献書誌] 駒田 洋,草川 茂,Claes Orvell,鶴留 雅人,西尾 真智子,伴戸 久徳,河野 光雄,松村 治雄,Erling Norrby,伊藤 康彦: "Antigenic diversity of human paraintluenza vivus type 1 isolates and their immunological relationship with Sendai virus revealed by using monoclonal antibodies" Journal of General Virology. 73. 875-884 (1992)
• [文献書誌] 宮原 研吾,北田 清吾,吉本 桃子,松村 治雄,河野 光雄,駒田 洋,鶴留 雅人,草川 茂,西尾 真智子,伊藤 康彦: "Molecular evolution of human paramyxouiruses Nucleotide Sequence of the human paraintluenza virus type 1 virus NP and M protein genes and construction of phylogenetic trees for all the human paramyxouiruses" Archives of Virology. 124. 255-268 (1992)