真核前核生物間接合の機構の生理・生化学的解析

1993 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 04454015
• 研究機関: 広島大学
• 研究代表者: 吉田 和夫 広島大学, 理学部, 教授 (70022720)
• 研究分担者: 設楽 惣助 広島大学, 総合科学部, 講師 (90034587) ; 鈴木 克周 広島大学, 理学部, 助手 (50221320)
• キーワード: 生物界間接合 / 接合伝達 / 伝達プラスミド / 大腸菌 / 酵母 / アグロバクリア / YAC / 性

研究概要

1.YAC(酵母人工染色体)プラスミドへoriTを導入した接合伝達性プラスミドpAY-YACBとpAY-YACEを新たに構築した.pAY-YACBはYACのテロメア連結部位へoriTを挿入したものであり,pAY-YACEはYACの通常のクローニング部位への挿入である.pAY-YACBはtra,mobを持つヘルパープラスミドにより可動化されて,大腸菌からパン酵母へ接合伝達された.これはパン酵母オートトローフコロニーの出現,サザンブロット,バックトランスフォーメーションにより証明された.pAY-YACBは線状染色体として酵母に存在するのでなくて環状プラスミドとして存在した.これが一般的なことかどうかもう少し実験例を集めなければならないが,pAY-YACの構築により巨大DNA用接合伝達ベクターの構築が現実的なものとなった.
2.土壌細菌Agrobacterium tumefaciensからpAYプラスミドがパン酵母へ接合伝達されることをはじめて見出した.これもオートトローフコロニーの出現,サザンブロット,バックトランスフォーメーション等により証明されている(投稿中).
3.土壌細菌A.tumefaciensのTiプラスミドはそのT-DNAを植物細胞へ伝達する系(T-complex)とTiプラスミド自身を他の土壌細菌へ接合伝達させる系(R-complex)を持っている.この両者について,その相互互換の観点から比較検討を行った.これは次年度も引き続き継続し行いたい.
以上の実験結果から生物界間接合の分子機構と進化についての研究上重要な手懸を得られたと考えている.

研究成果

• [文献書誌] M.Yamaguchi,K.Yoshida and N.Yanagishima: "Sexual agglutination substances requires a carrier glycoprotein for integration into the cell wall of Saccharomyces cerevisiae" Microbiology(bormely Jounal of General Microbiology). ac&pfnd.
• [文献書誌] K.Okamoto,T.Sekito and K.Yoshida: "The mitochondrial genome of yeast Hansenala Wingei encodes NADH dehydrogenase subunit aenes ND4L and ND5" Molecular and General Genetics. 243(In Press). (1994)
• [文献書誌] 岡本浩二,関藤孝之,北野之道,吉田和夫: "酵母ミトコンドリアゲノムの構造とその多様性" 蛋白質・核酸・酵素. 39(In Press). (1994)
• [文献書誌] 吉田和夫,西川正信,猪俣孝二,関藤孝之,松本由紀子: "生物環境応答としてのTrans-Ringdom Mating-真核生物酵母と原核生物大腸菌との接合の分子機構を中心として" 東北大学遺伝生態研究センター IGEシリーズ. 16. 21-37 (1993)
• [文献書誌] 吉田和夫,西川正信: "生物界間接合-大腸菌と酵母の接合の分子機構" 蛋白質・核酸・酵素. 38. 60-68 (1993)