| 研究課題/領域番号 |
04454107
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| 研究機関 | 京都大学 |
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研究代表者 |
内海 恭三 京都大学, 農学部, 教授 (90033266)
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| 研究分担者 |
南 直治郎 京都大学, 農学部, 助手 (30212236)
細井 美彦 京都大学, 農学部, 助手 (70192739)
酒井 裕 京都大学, 農学部, 助教授 (60089117)
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| キーワード | 性決定遺伝子 / SRY / 胚の性判別 / ウシ / PCR法 / デオキシ鎖反応 / 性分化 / BOV97M |
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| 研究概要 |
哺乳動物の性分化に関して、マウス、ウサギおよびヒトに於いて精巣を誘導する遺伝子遺伝子の一部がSRYとして同定されている。マウスでは、そのSRY領域の遺伝子を導入すると発生過程で精巣が誘導されることが、最近報告された。この研究では、ウシの性分化に関係する遺伝子配列を同定すると共に、その遺伝子を受精卵に導入して、発生過程に於ける性分化機構を解析すると共に、その遺伝子配列の一部をプライマーとしてPCR法によって胚を性分別することを目的としている。現在までに得られた結果は、(1)ウシSRYのcDNAのクローニング:ウシ精巣からAPGC法によってRNAを抽出分離し、さらに逆転写反応によってそのDNAを得た。既知の性決定遺伝子のアミノ酸配列は62%の相同性(保存領域に於いては80%の相同性)を有しているので、ヒトSRYの保存領域より上流の228bpから保存領域の上流部241bpまでの塩基配列をプローブとして、先に得られたウシ精巣のcDNAをPCR法で増幅し、その産物を電気泳動で単離検出して、約353bpの増幅産物を得た。このDNAをEco RIで処理して、サブクローニング後に、M13-ベクター特有プライマーを用いるデオキシ鎖反応法によってシークエンスした。現在その配列を解析中である。さらに、クローニングされた領域の遺伝子産物から、その領域の機能を解析する予定である。 (2)ウシ胚の性判別:ウシ胚盤胞の栄養膜細胞の一部を顕微操作によって分取し、その生検細胞を熱抽出して、ウシDNAを得る。ウシのYー染色体長腕部の反復配列の一部のDNA(BOV97M)をプライマーとして、ウシ胚盤胞DNAをPCR法によって増幅し、増幅産物の電気泳動から、BOV97Mの198pbを検出することによって、胚細胞の性を決定した。総計60胚の検定から27胚の雄と33胚の雌が分別された。それらの胚の移植によって、12頭の産子が得られ、総て判定通りの12頭の産子が得られ、他に15頭が妊娠継続中である。
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