腫瘍懐死因子の全身性および局所性作用の制御と解析

1993 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 04454189
• 研究機関: 大分医科大学
• 研究代表者: 樋口 安典 大分医科大学, 医学部, 助教授 (60040284)
• 研究分担者: 瀬戸口 美保子 大分医科大学, 医学部, 助手 (20236110)
• キーワード: CD14 / TNF / transgene / recombinant / diabetes / beta-cell / 〓DNA

研究概要

I.CD14遺伝子の発現制御の解析:マウスCD14ゲノム遺伝子の転写開始点上流-249bpから-255に存在するTPA responsive element様配列(TRE)、TGATTCAおよびその直ぐ下流のCT rich配列がCD14の発現制御に関与するシスエレメントとなることを明らかにした。ヒトCD14遺伝子のプロモーター領域の塩基配列を明かにし、マウス配列と比較した。
II.CD14 cDNAおよびゲノム遺伝子改変によるTNFの産生制御実験:
1.膜非結合型リコンピナントCD14(rCD14)の分離:nativeおよびcDNAの3'側コード部にmutationを加えc末端部が種々の長さで短縮したクローンを作成し、大腸菌および昆虫系ベクターで発現させた。単クローン抗体(mAb)を作成した。このmAbとCD14 cDNAを用いてKupffer細胞(KC)のCD14はLPS刺激により著しく発現増強し、常時強くCD14を発現し、LPS刺激では発現増強が軽度な腹腔Mphiとは著しく性質が異なることを明らかにした。さらにmAbを用いたFACSでKCと腹腔Mphiの解析を行っており、KCは特有な小集団のMphiに由来するる結果を得た。
2.CD14遺伝子TGマウスの作成:メタロチオネイン(MT)、U2alphaグロブリンおよびサイトメガロウイルスをプロモーターにしたnativeおよび変異CD14を注入したF_<1.>マウス由来の卵から各々のTGマウスを得た。これまでの亜鉛投与MTプロモーター変異CD14遺伝子マウスのノーザン法による解析では肝、小腸、精巣で強い発現が見られた。
III.TNFのランゲルハンス島beta細胞における発現TGマウスの検索:島はリンパ球の浸潤により著しく腫大が見られた。beta細胞の障害は軽微であった。浸潤リンパ球はCD4^+,CD8^-のTリンパ球あるいはslg^+Bリンパ球であった。小数のリンパ球で活性化が見られた。beta細胞はリンパ球で圧排されていたが、beta細胞の有意の減少は見られなかった。TCの島ではfibrosisが見られた。このfibrosisは抗CD3抗体投与で減少した。また、beta細胞上にMHCクラス抗原の発現は見られなかった。beta細胞の再生像が見られた。

研究成果

• [文献書誌] Matsuura,K.: "Identification of a tissue-specific regulatory element in the murine CD14 gene" Journal of Biological Chemistry. 267. 21787-21794 (1992)
• [文献書誌] Higuchi,Y: "Expression of Lumor necrosis factor・alpha Lransgene in murine pancrealic beta cells resuits in scvcre and permanent insulilis without cvolution towards diahctes" Joural of Experimental Medicine. 176. 1719-1731 (1992)
• [文献書誌] 山本 俊輔: "マクロファージ特異的分子" 臨床免疫. 24. 1047-1056 (1992)
• [文献書誌] Ohashi,P.S.: "Induction of diabetes is inftuenced by the infectious virus and loal expression of MHC class I and tumor necrosis factor-o" Joural of immunology. 150. 5185-5194 (1993)
• [文献書誌] 山本 俊輔: "骨粗鬆症におけるオステオポンチンの分子病理学的研究" 臨床成人病. 23. 115-117 (1993)
• [文献書誌] Yamamoto,S.: "Structure of the osteopontin gene and promoter" Annals New York Academy of Science. (in press).
• [文献書誌] Mstsuura,K.: "pregulation of mouse CD14 expression in Kupffer cells by ipopolysaccharide" Journal of Experimental Medicine. (in press).
• [文献書誌] Yamamoto,S.: "Leukocyte Typing V white Cell Differentiation Antigens" Springer Verlag, 10(in press) (1994)
• [文献書誌] Yamamoto,S.: "Leukocyte Typing V white Cell Differentiation Antigens" Springer Verlag, 10(in press) (1994)
• [文献書誌] 山本 俊輔: "好中球、" 中山書店 10(印刷中), (1994)