感染性cDNAを用いたパラミクソウイルスの複製機構と病原性発現機序の解析

1992 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 04454200
• 研究機関: 三重大学
• 研究代表者: 伊藤 康彦 三重大学, 医学部, 教授 (00022872)
• 研究分担者: 河野 光雄 三重大学, 医学部, 助手 (00234097) ; 松村 治雄 三重大学, 医学部, 助手 (10229536) ; 鶴留 雅人 三重大学, 医学部, 助教授 (50159042)
• キーワード: パラミクソウイルス / HPIV-2 / 感染性cDNA / 発現ベクター

研究概要

本年度はHPIV-2の感染性cDNAを作製の為の準備の研究を逐行し、かなりの成果を得た。第1には、HPIV-2のすべての遺伝子、NP、P、M、F、HNおよびL遺伝子cDNAをpVCL19ベクターに組み込むことに成功した。第2としては、膜蛋白遺伝子、[F(膜融合蛋白)とHN(膜融合調節蛋白]をpcDLSRαにそれぞれ組み換えてHeLa細胞で発現させたところ生物活性を確認できた。第3としてはHPIV-2P蛋白遺伝子をYM-1ベクターに組み込み、Recombinant Baculoウイルスを作製し、sF細胞で発現させたところP蛋白が大量に発現され、今後この蛋白を精製し、その生物活性、モノクローナル抗体のマッピングを行う予定である。興味深いことに、P蛋白とともにV蛋白も発現され、edited RNAも見い出されたので、いずれかのステップでEditingが起っているのは確かになった。現在、このBaculoウイルス系で見い出されたEditingの分子機構の解析に全力を挙げている。第4としてはHPIV-2M遺伝子をブルースクリプトIIベクターに組み換え、大腸菌で発現したところ、培養細胞でのM蛋白と同分子量のprutuetの検出でき、モノクローナル抗体の反応性も確かめられた。今後、この系を用いてM蛋白の機能を解析して行く予定である。第5としてはRNAVプリコンを作製し、リーダー配列、トレイラー配列、R1配列およびR2配列の機能を解析しており、R1配列がmRNAへの転写に必須であることを示唆する結果を得ている。 さらに、ゲノムサイズのcDNAを構築し、ワクチニアベタターから細胞内発現させた。T7RNAポリメラーゼで全構成蛋白を発現させてウイルス粒子を形成させるために、ブルースクリプトIIベクター系での発現用クローンを作製中である。

研究成果

• [文献書誌] 河野 光雄.鶴留 雅人.沖 尚弘.西尾 真智子.駒田 洋.松村 治雄.草川 茂.太田 尚孝.伊藤 康彦: "Sequence determination of the P gene of simian virus 41: Presence of irregular deletions hear the RNA-edting sites of paramyxoviruses." Journal of General Virology.
• [文献書誌] 伊藤 康彦.駒田 洋.草川 茂.鶴留 雅人.松村 治雄.河野 光雄.太田 尚孝.西尾 真智子: "Fusion regulation prcteins on the cell surface: Isclation and characterization of monoclonal anribodies which enharce giant polykaryoayte formation in NDV-infected cell lihnes of human origin" Journal of Virology. 66. 5999-6007 (1992)
• [文献書誌] 小川 昌弘.六鹿 典子.鶴留 雅人 河野 光雄.松村 治雄.草川 茂 駒田 洋.西尾 真智子.伊藤 康彦: "Nucleotide sequence analysis of the simian virus 41 gene encoding the large (L) protein and construction of a phylogenetic tree for the L proteins of paramyxoviruses" Journal of General Virology. 73. 2743-2750 (1992)
• [文献書誌] 樋田 泰光.宮原 慶裕.河野 光雄.鶴留 雅人.松村 治雄.草川 茂.駒田 洋.西尾 真智子.伊藤 康彦: "Sequence analysis of the large (L) protein of simian virus 5" Journal of General Virology. 73. 1005-1010 (1992)
• [文献書誌] 駒田 洋.草川 茂.Claes Orvell.鶴留 雅人.西尾 真智子.伴戸 久徳.河野 光雄.松村 治雄.Erling Nirrby.伊藤 康彦: "Antigenic diversity of human parainflueuza virus type 1 isolates and their immunological relatiouship with Sevdai virus revealed by using monoclonal antibodies" Journal of General Virology. 73. 875-884 (1992)
• [文献書誌] 宮原 研吾.北田 清吾.吉本 桃子.松村 治雄.河野 光雄.駒田 洋.鶴留 雅人.草川 茂.西尾 真智子.伊藤 康彦: "Molecular evolution of human paramyxoviruses. Nucleotide sequence of the human parainfluenza virus type 1 virus NP and M protein genes and construction of phylogenetic trees for all the human paramyxoviruses." Archives of Virology. 124. 255-268 (1992)