| 研究課題/領域番号 |
04454269
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| 研究機関 | 京都府立医科大学 |
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研究代表者 |
山口 希 京都府立医科大学, 医学部, 助教授 (40079752)
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| 研究分担者 |
山村 睦朗 京都府立医科大学, 医学部, 助手 (10220443)
今西 二郎 京都府立医科大学, 医学部, 教授 (40112510)
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| キーワード | エンドセリン / エンドセリン分解酵素 / サンドイッチELISA |
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| 研究概要 |
1)エンドセリン分解酵素(endothelin degrading enzyme=EDE)の精製を行なった。ゲル濾過および陰イオン交換カラム、ヒドロキシルアパタイトカラムにより効率良く精製できた。分子量はSDS-PAGEで約83kdaで、等電点6.8のsingle peptideからなり、N-末端アミノ酸配列はblockされておりlysyl-endopeptidase digestionによる部分アミノ酸配列解析から4個の部分アミノ酸配列が明らかになり、データベース検索の結果、本酵素は新規の物質であることが判明した。
2)ポリクロナルおよびモノクロナル抗体を用いたサンドイッチELISAの確立によって一応ナノグラムの定量系ができた。培養上清を用いた系ではこの感度でも問題ないが、ヒトの血清では感度が低いことが判明した。
3)HPC-YO細胞のcDNAライブラリーから特異抗血清と明らかになった部分アミノ酸配列に対するDNAプライマーによるPCR法とで本酵素のcDNAクローニングに着手した。全長約2.8kbのcDNAにコードされた本酵素はDNAシークエンスの解析からも新規物質であることが確認された。クローニングされたcDNAの一部にはわずかながら不明の部分があり、これを明らかにするために今少しの時間の猶予を必要とする。
4)cDNAクローニングが完了していないことから、northern blot,in situ hybridizationによる本酵素の局在の分析が出来ていない。
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