1992 年度実績報告書

アルカリ性ホスファターゼ分子中C末端構造を変換する酵素の検出とその局在

研究課題

研究課題/領域番号	04454548
研究機関	埼玉医科大学
研究代表者	菰田二一埼玉医科大学, 医学部, 助教授 (10049835)
研究分担者	小山岩雄埼玉医科大学短期大学, 臨床検査科, 助教授 (30153688) 坂岸良克埼玉医科大学, 医学部, 教授 (90049768)
キーワード	アルカリ性ホスファターゼ / GPI-アンカー / ペプチドアンカー / ペプチド合成 / 抗疎水性アミノ酸配列抗体 / ミクロソーム分画 / ペプチダーゼ活性
研究概要	生体膜結合酵素であるアルカリ性ホスファターゼ(ALP)分子のC末端アミノ酸配列には特徴ある疎水性ペプチド構造があるが、この部位は通常、直ちに糖脂質様膜アンカー(GPI-アンカー)に変換され、ここが生体膜との結合に関与していると言われる。我々は、既に回腸組織や癌化した組織中にはGPI-アンカーを持たず、その前駆体であるペプチドアンカーを持つと思われるALPが存在することを見つけた。本研究では、先づ前駆体ALPのC末端側にある疎水性ペプチドを合成し、これに対する抗体を作製したところ、この抗体と反応するALPが、十二指腸部位よりも回腸側により多く存在し、満期胎盤組織中にはペプチドアンカーを持つALPが少なかった。これに対し、胃癌組織や肺癌組織では正常組織と比較してペプチドアンカーを持つALPが増加することを見つけた。またイギリスのケンブリッジ大学より分与されたALPのC末端にあるGPI-アンカーに対する抗体では、回腸部位よりも十二指腸側に、この抗体と反応するALPが多く存在し、癌組織ではGPI-アンカーに対する抗体と反応する成分は相対的に低いことがわかった。次に小腸及び胎盤組織を細胞下分画し、それぞれの分画に、成熟ALPのC末端アミノ酸配列から前駆体ALPのC末端疎水性アミノ酸配列にまたがるペプチドを添加したところ、生体と同じ位置で合成ペプチドが切断されたのは、ミクロソーム分画で最も強く、上清画分やミトコンドリア画分にはプロチアーゼ活性が低かった。従って、前駆体ALPのペプチドアンカーをGPI-アンカーに変換する活性は、ミクロソームの膜成分に存在する可能性が高いと思われた。

研究成果

(6件)

すべてその他

すべて文献書誌 (6件)

[文献書誌] Saheki,S.,Ochi,M.,Sakagishi,Y.,Koyama,I.,Komoda,T.et al.: "Intestinal type alkaline phosphatase hyperphosphatasemia associated with liver cirrhosis" Clinica Chimica Acta. 210. 63-73 (1992)
[文献書誌] Komoda,T.,Koyama,I.,Fujimori-Arai,Y.,Sakagishi,Y.et al.: "Lectin affinity chromatography as a useful tool for determining the heterogeneity of alkaline phosphatase:Intestinal-like alkaline phosphatase" Progress in Clinical Biochemistry,Elsevier Sci.Publisher Co.345-349 (1992)
[文献書誌] Hoshino,T.,Kawano,K.,Koyama,I.,Sakagishi,Y.,Komoda,T.et al.: "A case of benign familial hyperphosphatasemia of intestinal origin" Clinical Biochemistry(in press). (1993)
[文献書誌] Irino,T.,Matsushita,M.,Komoda,T.,Sakagishi,Y.et al.: "Higher substrate specificity to phosphorylcholine of human intestinal alkaline phosphatase" The 4th international symposium of alkaline phosphatase research,Antwerp,Belgium. 40- (1992)
[文献書誌] Koyama,I.,Fujimori-Arai,Y.,Hirano,K.,Komoda,T.et al.: "The intestinal alkaline phosphatase are uniquely expressed in rabbit tissues" The 4th international symposium of alkaline phosphatase research,Antwerp,Belgium. 41- (1992)
[文献書誌] 菰田二一,坂井博,小山岩雄,坂岸良克他: "ヒトおよびラットアルカリ性ホスファターゼ(AP)のC末端側に存在するペプチドアンカーについて" 生化学. 64. 715- (1992)

1992 年度 実績報告書

アルカリ性ホスファターゼ分子中C末端構造を変換する酵素の検出とその局在

研究代表者

菰田 二一 埼玉医科大学, 医学部, 助教授 (10049835)

研究成果

[文献書誌] Saheki,S.,Ochi,M.,Sakagishi,Y.,Koyama,I.,Komoda,T.et al.: "Intestinal type alkaline phosphatase hyperphosphatasemia associated with liver cirrhosis" Clinica Chimica Acta. 210. 63-73 (1992)

[文献書誌] Komoda,T.,Koyama,I.,Fujimori-Arai,Y.,Sakagishi,Y.et al.: "Lectin affinity chromatography as a useful tool for determining the heterogeneity of alkaline phosphatase:Intestinal-like alkaline phosphatase" Progress in Clinical Biochemistry,Elsevier Sci.Publisher Co.345-349 (1992)

[文献書誌] Hoshino,T.,Kawano,K.,Koyama,I.,Sakagishi,Y.,Komoda,T.et al.: "A case of benign familial hyperphosphatasemia of intestinal origin" Clinical Biochemistry(in press). (1993)

[文献書誌] Irino,T.,Matsushita,M.,Komoda,T.,Sakagishi,Y.et al.: "Higher substrate specificity to phosphorylcholine of human intestinal alkaline phosphatase" The 4th international symposium of alkaline phosphatase research,Antwerp,Belgium. 40- (1992)

[文献書誌] Koyama,I.,Fujimori-Arai,Y.,Hirano,K.,Komoda,T.et al.: "The intestinal alkaline phosphatase are uniquely expressed in rabbit tissues" The 4th international symposium of alkaline phosphatase research,Antwerp,Belgium. 41- (1992)

[文献書誌] 菰田 二一,坂井 博,小山 岩雄,坂岸 良克 他: "ヒトおよびラットアルカリ性ホスファターゼ(AP)のC末端側に存在するペプチドアンカーについて" 生化学. 64. 715- (1992)

1992 年度実績報告書

菰田二一埼玉医科大学, 医学部, 助教授 (10049835)

[文献書誌] 菰田二一,坂井博,小山岩雄,坂岸良克他: "ヒトおよびラットアルカリ性ホスファターゼ(AP)のC末端側に存在するペプチドアンカーについて" 生化学. 64. 715- (1992)