1992 年度実績報告書

血小板機能の発現とその異常症に関する分子生物学的研究

研究課題

研究課題/領域番号	04454570
研究機関	京都大学
研究代表者	大熊稔京都大学, 医学部, 教授 (50026986)
研究分担者	高山博京都大学, 医学部, 助手 (10197220)
キーワード	血小板 / 機能異常症 / 受容体 / トロンボサキンA_2 / コラーゲン / 12-リポキシゲナーゼ / 抗血小板抗体 / mRNA
研究概要	1.血小板トロンボキサンA_2(TXA_2)受容体異常症に関する研究。TXA_2に対して反応低下を示す真性多血症の症例についてTXA_2受容体遺伝子を検討する目的で、患者末梢血よりDNAを抽出しサザンブロット分析を行ったが、正常と差を認めなかった。また、PCR法を用いて受容体遺伝子の蛋白翻訳領域の一部(N末より第6膜貫通部位まで)を増幅し、このDNA断片をサブクローニングし塩基配列を決定した結果、この領域については欠失、変異は認められなかった。現在、他領域の点突然変異の有無につき、塩基配列の解析を進めている。更に患者血小板よりRNAを抽出し、RT-PCR法により血小板に発現された受容体についても同様の検討を行っている。 2.コラーゲン受容体(P62)に関する研究:期限切れの血小板濃縮血漿から分離した洗滌血小板を可溶化し、DEAF-セファローズCL-6BとWGA-アガロースの各クロマトグラフィーおよび調整的SDS-PAGEで粗精製P57/P62(非還元/還元)を得た。この粗精製P57にはコラーゲンの凝集活性阻害作用を認めたことからコラーゲンへの結合が示唆された。また、このP57を抗原としてBALB/C系マウスを兔疫すると正常ヒト血小板を強く凝集するが、P57欠損患者の血小板に対する凝集活性の弱い抗血清が得られた。現在このマウス脾細胞を用いてP57に対するモノクロナル抗体を作成中である。 3.12-リポキシゲナーゼ(12-LOX)欠損症に関する研究。12-LOX活性欠損の骨髄増殖性疾患3症例の血小板につき、その細胞質画分の本酵素蛋白量を酵素兔疫測定法を開発して測定し正常人に比し著減(約10%)を認めた。またPCR法を用いた血小板12-LOXmRNAの定量でも著減を認めたことから、酵素活性の低下はmRNAの転写レベルの低下に由来することが明らかとなった。

研究成果
(7件)

すべてその他

すべて文献書誌 (7件)

[文献書誌] Ushikubi F: "Analysis of the defective signal transduction mechanism throrgh the platelet thromboxane A_2 receptor in a patient with polycythemia vera" Thrombosis and Haemostasis. 67. 144-146 (1992)
[文献書誌] Ryo R: "Deficiency of p62,a putative collagen receptor,in platelets from a patient with defective collagen-induced platelet aggregation" American Journal of Hematology. 39. 25-31 (1992)
[文献書誌] Moroi M: "Platelet adhesion to collagen-coated wells:analysis of this complex process and a comparison with the adhesion to matrigel-coated wells" Biochimica et Biophysica Acta. 1137. 1-9 (1992)
[文献書誌] Okuma M: "Qualitative platelet abnormalities in myeloproli-ferative disorders" Thrombotic and Haemorrhagic Disorders. 6. 29-39 (1992)
[文献書誌] Matsuda S: "Decreased messenger RNA of arachidonate 12-lipoxygenase in platelets of patiens with myeloproliferative disorders" Biochimica Biophysica Acta. 1180. 243-249 (1993)
[文献書誌] Fuse I: "Defective signal transduction induced by thromboxane A_2 in a patient with a mild bleeding disorder" Blood. (1993)
[文献書誌] Okuma M: "Hemostasis and Circulation" Takada A and Budzynski AZ, 6 (1992)

1992 年度 実績報告書

血小板機能の発現とその異常症に関する分子生物学的研究

研究代表者

大熊 稔 京都大学, 医学部, 教授 (50026986)

研究成果

[文献書誌] Ushikubi F: "Analysis of the defective signal transduction mechanism throrgh the platelet thromboxane A_2 receptor in a patient with polycythemia vera" Thrombosis and Haemostasis. 67. 144-146 (1992)

[文献書誌] Ryo R: "Deficiency of p62,a putative collagen receptor,in platelets from a patient with defective collagen-induced platelet aggregation" American Journal of Hematology. 39. 25-31 (1992)

[文献書誌] Moroi M: "Platelet adhesion to collagen-coated wells:analysis of this complex process and a comparison with the adhesion to matrigel-coated wells" Biochimica et Biophysica Acta. 1137. 1-9 (1992)

[文献書誌] Okuma M: "Qualitative platelet abnormalities in myeloproli-ferative disorders" Thrombotic and Haemorrhagic Disorders. 6. 29-39 (1992)

[文献書誌] Matsuda S: "Decreased messenger RNA of arachidonate 12-lipoxygenase in platelets of patiens with myeloproliferative disorders" Biochimica Biophysica Acta. 1180. 243-249 (1993)

[文献書誌] Fuse I: "Defective signal transduction induced by thromboxane A_2 in a patient with a mild bleeding disorder" Blood. (1993)

[文献書誌] Okuma M: "Hemostasis and Circulation" Takada A and Budzynski AZ, 6 (1992)

1992 年度実績報告書

大熊稔京都大学, 医学部, 教授 (50026986)