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複製に必要とされるDNAヘリカーゼの検索をヒト培養細胞より行なった。これまで真核生物から複数のDNAヘリカーゼが単離されているが、複製に要求されるものは明らかにされていない。そこで複製に要求される活性ということに視点を置いてDNAヘリカーゼ検索を行ない、以下の点が明らかになった。
1.DNAヘリカーゼを検索するために、この酵素活性依存的にDNA合成を開始するDNA配列をクローニングした。この配列には、二塩基反復配列があり、DNAをアンワインディングさせる機能を持っていた。
2.抗DNAポリメラーゼα抗体カラムに結合するタンパク質分画よりDNAヘリカーゼ活性(DNAヘリカーゼAA)を見いだした。この酵素は、見かけの分子量210kDa、3′->5′という反応の方向性を持ち、ヒト由来の一本鎖DNA結合タンパク質、RPA依存的であった。しかしこれ単独では、上記の反応で活性を示さなかった。
3.DNAヘリカーゼ基質を改良し、反応進行の連続性(processivity)の高いDNAヘリカーゼを検索した。この結果、細胞核に強く結合しているDNAヘリカーゼを見いだしDNAヘリカーゼn(nuclear)とした。DNAヘリカーゼnは、沈降係数9.2S、見かけ上の分子量190kDaを示した。この酵素を構成する110kDaのペプタイドにATPが結合し、反応の方向性は、3′->5′であった。DNAヘリカーゼnの活性はヒト由来のRPAに依存して活性を示し、RPAと特異的な相互作用により活性を持つと考えられる。既存のDNAヘリカーゼにはこれらの特性に対応するものがなく、DNAヘリカーゼnは新規のものと考えられる。特に複製タンパク質であるRPAに依存する点は、このDNAヘリカーゼが複製に関与することを強く示唆するものである。
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