| 研究概要 |
本研究では,分子シャペロンの一つであるシャペロニン(hsp60)を高度好熱菌Thermus thermophilusより精製,結晶化し,その三次元構造をX線結晶解析によって解明することを目的とする.
昨年度までに,高度好熱菌Thermus thermophilusのシャペロニンの結晶化を行い,平板状および六角柱状の2種の結晶形が得られ,平板状結晶ではcpn60とcpn10がオリゴマーとして存在しており,単斜晶系,空間群P2_1に属していること,六角柱状結晶ではcpn60サブユニットが自然に分解を受けた結果50kDのフラグメントとなって存在しており,六方晶系,空間群P6_322に属していることがわかった.
これまで得られた2種の結晶について,高エネルギー物理学研究所放射光実験施設のシンクロトロン放射光を用いて,巨大分子用ワイセンベルクカメラによって回折強度測定を行った.しかし,その分解能はそれぞれ8A程度であり,高分解能のX線構造解析を行うには不十分で,完全な回折強度データを得ることができなかった.
六方晶系結晶の結晶性向上を目指して,1)自然に分解を受けたシャペロニン標品を精製したもの,2)その分解を受けた切断箇所と同定しトリプシンなどのタンパク質分解酵素で意識的に切断したもので結晶化を行った.その結果,異なる格子定数の結晶が得られ分解能も向上したが,これまでのところ,原子レベルの分解能には至っていない.また,すべての結晶について低温での回折強度測定を行い,その有効性を確認した.
種々の結晶学的諸計算を効率的に行うため,われわれが使用経験の豊富なタンパク質構造解析用総括プログラム“PROTEIN"を核としたシステムを,グラフィックスワークステーション上に構築して,X線構造解析の迅速化をはかった.
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