1993 年度実績報告書

光学顕微鏡下における単一蛍光分子イメージング

研究課題

研究課題/領域番号	04508002
研究機関	慶応義塾大学
研究代表者	木下一彦慶應義塾大学, 理工学部, 教授 (30124366)
研究分担者	森基シグマ光機(株), 技術部, 取締役部長植竹敏文 (株)オリオンレズ設計, 代表取締役平野憲一浜松ホトニクス(株)筑波研究所, 研究員宮田英威慶應義塾大学, 理工学部, 専任講師 (90229865)
キーワード	蛍光顕微鏡(超高感度) / 1分子イメージング / 無蛍光対物レンズ / ローダミン / 核酸オリゴマー / 蛍光褪色
研究概要	1.無蛍光対物レンズの開発と改良硝材を始め、接着剤・充填材、コーティング材などあらゆる材料を広範に検定・検討し、種々の試作試験を行った結果、無蛍光対物レンズの最終設計がまとまり、完成品製作を開始した。一部部品につき、十分な工作精度が得られない可能性があることが分かり、現在この部分の設計変更も含めて対策を検討している。 2.蛍光色素数分子を結合した化合物の観察の成功色素1分子の観察は上記無蛍光対物レンズの完成を待つとして、とりあえずテトラメチルローダミン5分子を結合した核酸オリゴマーの観察を試みた。このオリゴマーは、将来の細胞内1分子観察に備えて特に合成したものである。観察にはニコン倒立顕微鏡を用いたが、光源にレーザーを採用し、(A)励起レーザー光を鏡体外に逃がすよう顕微鏡を改造、(B)励起光の散乱を最小限に押さえる光学系の設計、により各々背景光を10分の1に減らすことができた(両者併せて100分の1)。さらにカバーグラス洗浄法の工夫なども加え、上記オリゴマーを個別の点として数秒間にわたりイメージできた。オリゴマー中の色素1分子の褪色に相当すると思われる信号も得られ、褪色の観察が1分子を見ていることの証明に有効であることが示唆された。 3.Axiovert顕微鏡の改造上記ニコン顕微鏡での試験結果から、最終的に用いる予定であるAxiovert顕微鏡の改造方針が定まり、改造を開始した。鏡体側面部および底面を切り取って中の光学系を入れ替えるというかなり大がかりな工作で現在切り取りと光学ベンチへの取り付けが完了し、内部の光学系の試作にとりかかっている。

研究成果

(7件)

すべてその他

すべて文献書誌 (7件)

[文献書誌] Hiroyuki HAKOZAKI,et al.,: "“Sliding Force between a Small Number of HMM Molecules and a Single Actin Filament under Optical Tweezers"" J.Muscle Res. Cell Motility,. 14. 358-358 (1993)
[文献書誌] Takayuki HISHIZAWA,et al.,: "Measurement of sliding Force Generated on an Actin Filament nuder Various Concentrations of HMM in an In Vitro Motile System"" J.Muscle Res. Cell Motility,. 14. 357-358 (1993)
[文献書誌] Hiroyasu ITOH,et al.,: "“Electroporation Visualized under a Multi‐Shot Pulsed‐Laser Fluorescence Microscope System" Proc.SPIE(The Interantional Society for Optical Engineering). 2002. 118-125 (1993)
[文献書誌] Hiroyuki HYUGA,et al.,: "“Steady‐State Deformation of a Vesicle in Alternating Electric Fields"" Bioelectrochem.Beoenerg.,. 32. 15-25 (1993)
[文献書誌] Masahiro HIBINO,et al.,: "“Time Courses of Cell Electroporation As Revealed by Submicrosecond Imaging of Transmembrane Potential"" Biophys.J.64. 1789-1800 (1993)
[文献書誌] Hidetake MIYATA,et al.,: "“Transformation of Actin‐Encapsulating Liposomes Induced by CytochalasinD"" Biophys,J.,Submitted.
[文献書誌] Kazuhiko KINOSITA,et al.,: "“Orientation of Actin Monomers in Moving Actin Filaments"" Plenum(New York), 9 (1993)

1993 年度 実績報告書

光学顕微鏡下における単一蛍光分子イメージング

研究代表者

木下 一彦 慶應義塾大学, 理工学部, 教授 (30124366)

研究成果

[文献書誌] Hiroyuki HAKOZAKI,et al.,: "“Sliding Force between a Small Number of HMM Molecules and a Single Actin Filament under Optical Tweezers"" J.Muscle Res. Cell Motility,. 14. 358-358 (1993)

[文献書誌] Takayuki HISHIZAWA,et al.,: "Measurement of sliding Force Generated on an Actin Filament nuder Various Concentrations of HMM in an In Vitro Motile System"" J.Muscle Res. Cell Motility,. 14. 357-358 (1993)

[文献書誌] Hiroyasu ITOH,et al.,: "“Electroporation Visualized under a Multi‐Shot Pulsed‐Laser Fluorescence Microscope System" Proc.SPIE(The Interantional Society for Optical Engineering). 2002. 118-125 (1993)

[文献書誌] Hiroyuki HYUGA,et al.,: "“Steady‐State Deformation of a Vesicle in Alternating Electric Fields"" Bioelectrochem.Beoenerg.,. 32. 15-25 (1993)

[文献書誌] Masahiro HIBINO,et al.,: "“Time Courses of Cell Electroporation As Revealed by Submicrosecond Imaging of Transmembrane Potential"" Biophys.J.64. 1789-1800 (1993)

[文献書誌] Hidetake MIYATA,et al.,: "“Transformation of Actin‐Encapsulating Liposomes Induced by CytochalasinD"" Biophys,J.,Submitted.

[文献書誌] Kazuhiko KINOSITA,et al.,: "“Orientation of Actin Monomers in Moving Actin Filaments"" Plenum(New York), 9 (1993)

1993 年度実績報告書

木下一彦慶應義塾大学, 理工学部, 教授 (30124366)