| 研究課題/領域番号 |
04556040
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| 研究種目 |
試験研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
畜産学
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| 研究機関 | 東京大学 |
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研究代表者 |
舘 鄰 東京大学, 農学部, 教授 (30011711)
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| 研究分担者 |
東條 英昭 東京大学, 農学部, 助教授 (20041668)
森 祐司 東京大学, 農学部, 助教授 (40157871)
澤崎 徹 東京大学, 農学部, 教授 (00012047)
河本 馨 東京大学, 農学部, 教授 (30011894)
高橋 迪雄 東京大学, 農学部, 教授 (30011943)
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| 研究期間 (年度) |
1992 – 1994
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| キーワード | シバヤギゲノムライブラリー / 家畜バイオテクノロジーc- / SRY / c-kit / 過排卵 / 体外卵成熟 / 体外受精 / メチル化 / Dpnl / Bal 31 |
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| 研究概要 |
(1)シバヤギゲノムDNAをSau 3Alにより部分消化し、λファージに挿入してゲノムライブラリーを構築した。このライブラリーを用いて、家畜のバイオテクノロジーにおいて応用価値の高い性決定遺伝子SRYの単離を試みた。ヒトSRY、および、シバヤギSRYのHMGbox部分のPCRによる増幅DNA断片をプローブとしてスクリーニングすることにより、SRY構造遺伝子ならびにプロモーター領域、3′側の非翻訳領域を含む、SRY遺伝子の全長をクローニングと塩基配列の決定を行うことに成功した。(2)c-kitは哺乳類において、生殖細胞、特に始原生殖細胞(PGC)の生存維持に重要な役割を果たすことが知られている。今回の研究で、シバヤギc-kitのcDNAをクローニングし、CRF全長、ならびに、3′UTRの塩基配列を決定した。(3)反芻類家畜における、過排卵誘発の条件を、シバヤギを用いて検討した。GnRH、PGF2α、FSHおよびHOGの投与の組合せを、それぞれの投与日の間隔を変えて排卵数に対する影響を検討した。GnRH(0日)、PGF2α(2日目)、FSH(4,5,6日目)、HOG(7日目)の処置が最も有効であるらしいことを示す結果が得られたが、今後も、さらに検討が必要である。(4)形質転換ウシ作出の基礎研究として、ウシ屠体卵巣卵子を用いた、体外成熟、体外受精、および、体外胚発生の各種条件の検討を行った。体外受精については、凍結精液作成時の希釈液の種類ならびに、精子のドナー牛の個体差の影響が大きいことが判明した。(5)DNAの顕微注入法による外来遺伝子導入の際に、胚を移植する前に、導入遺伝子がゲノムに組み込まれたTg胚を、効率よく選別する方法の開発を試みた。その結果、メチル化したDNA断片の注入後in vitro培養した胚の割球からグラスミルク法でDNAを回収し、プロテアーゼK処理後、Dpnl、Bal3lなど、メチレーションサイトに特異的な制限酵素を用いて判別する方法が有効であることが、マウス胚を用いた実験で明らかにされた。この方法は、家畜におけるTg動物作出の際に、実用的方法として展開することができる。
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