分裂酵母を動物細胞の高次制御機構研究のための生きた試験管として使用する方法の開発

1994 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 04557011
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 岡山 博人 東京大学, 医学部(医), 教授 (40111950)
• 研究分担者: 永田 昭久 東京大学, 医学部(医), 講師 (50155933)
• キーワード: 分裂酵母 / 異種間遺伝子相補 / 同種間遺伝子相補 / 細胞周期 / 相同組換え / チェックポイント機構

研究概要

今年度も、分裂酵母を宿主とした異種間、同種間cDNA発現クローニング系の効率化及び応用を進めた。異種間遺伝子相補に関しては、昨年作成したが、自身のcdc25フォスファターゼを動物細胞のcdc25フォスファターゼに入替えた分裂酵母を宿主として、cdc25Aの負の制御因子のクローニングを試み、活性のある遺伝子の単離に成功した。これまでに知られたいない未知の遺伝子である。詳細な解析は、現在進行中である。
同種間遺伝子相補に関しては、新しいG2期チェックポイント遺伝子cdsl、分化の制御因子nrd1、細胞周期開始因子遺伝子rep2のクローニングに成功した。Cdslは、タンパクリン酸化酵素で、DNAポリメラーゼαと結合し、DNA合成をモニターし細胞分裂の開始をブロックする因子である。Rep2は、これまでに我々が発見したRes2タンパクと作用し、細胞周期の開始を調節する重要な因子である。Nrd1は、RNA結合タンパクドメインを持ち、分化の開始に必須なSte11転写因子の発現調節を行っていることが分かった。このように、G2期チェックポイント停止のためのDNA合成モニター機構の解明や細胞周期の開始機構、分化開始の調節機構の一端の解明ができた。
相同組み換えによる遺伝子導入のための標的遺伝子の候補を少なくとも50種類単離した。これから、ここの遺伝子に関して標的遺伝子とした最適か否かを検討していく。
分裂酵母を用いたタンパク質の大量発現系を旭硝子研究所と共同で完成した。遺伝子コピーを増加させる方策、翻訳効率の至適化等により、全タンパク質の50%までに産生量を上げることができた。

研究成果

• [文献書誌] Jinno Shige ki: "cdc25A is ancvel phosphatase functioning early in the cell cycle." EMBO J.13. 1549-1556 (1994)
• [文献書誌] Mura kami.shigeki: "Highly sensitive detection of viral RNA gencmes in blocq specimens by an cptimiged reverse tranicription・pclymerace chain reaction" J.Med.Virol.43. 175-181 (1994)
• [文献書誌] Manabe,Sadao: "production of nonstructural prctein of hepotitis C vivus reguires a putative viral proteace encoded by NS3." Virol.196. 636-644 (1994)
• [文献書誌] Sugiyama.Akio: "A zinc finger protein controis the onset of premeictic DNA synthesis of fission yeast in a Mei2-independent cascade." EMBO J.13. 1881-1887 (1994)
• [文献書誌] Miyamoto.Masaaki: "res2^+ a new memher of cdc10^+/SW14family,contrcis the “stavt"of mitotic and meictic cycles in fission Yeast." EMBO J.13. 1873-1880 (1994)
• [文献書誌] Obara-Ishihara,Tomoko: "AB-type cyclin regulates conjugation via interaction with cell cycle “start"genes in f.ssion yease." EMBO J.13. 1863-1872 (1994)