新しい抗血栓性治療薬開発のための基礎研究

1992 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 04557015
• 研究機関: 九州大学
• 研究代表者: 岩永 貞昭 九州大学, 理学部, 教授 (90029942)
• 研究分担者: 船津 昭信 (財)化学及血清療法研究所, 第3製造部, 部長 ; 川畑 俊一郎 九州大学, 理学部, 助手 (90183037)
• キーワード: 蛇毒金属プロテアーゼ / 抗血小板凝集因子 / disintegrin族 / 出血因子 / 抗血栓性治療薬 / Trigramin / Rho dostomin / モザイク蛋白質

研究概要

ハブ毒中の出血因子、HR1B(60kDa)は、NH_2末端側に金属プロテアーゼ領域及び中央にdisintegrin(血小板凝集阻止因子)、COOH末端にCys-rich領域を含むモザイク様タンパク質である。一方、disintegrinポリペプチド族の一種であるtrigraminやrhodostomin前駆体タンパク質のNH_2末端側には、HR1Bと相同性の高い配列を示す金属プロテアーゼを含む。従って、最近、多数の蛇毒から単離された抗血小板凝集因子のdisintegrin族はすべて翻訳後、毒腺あるいは採毒時に自己消化で生成した可能性が高い。本年度は、このことを検証するため、HR1B及び新たにハブ毒から単離した出血因子のHR1A、さらにガラガラ蛇毒の出血性金属プロテアーゼのHT-1を、Ca^<2+>非存在下で自己消化(37℃、3〜12時間)させるとともに、遊離した断片の構造を調べた。その結果、いずれの出血因子も31〜34kDaの断片を遊離することが明らかとなった。そこでこれら断片をそれぞれ単離し、全アミノ酸配列を決定した結果、それらの断片はdisintegrinとCys-rich領域を含んだ。従って、disintegrin族はいずれも蛇毒中の金属プロテアーゼ分子から由来した可能性が考えられる。本年度は、さらにこれまで我々の研究室で構造決定したHR1B及びHR1A、RVV-X、HT-1から由来するdisintegrin族のアミノ酸配列を基に、抗血栓性を示すと思われる領域を推定し、幾つかのペプチドを合成した。これらのペプチドの抗血栓性については目下評価実験を進めつつある。
一方、自己消化の際に切断される周辺の配列及び蛇毒金属プロテアーゼによるフィブリノーゲンの切断位置を参考に、蛍光基と消光基を含むペプチド基質の合成を試みた。その結果、10ケの合成基質の中で、蛇毒金属プロテアーゼの良い基質としい2-aminobenzoyl(Abz)-Ser-Pro-Met-Leu-2,4-dinitrobenzylamide(Dna)が開発された。

研究成果

• [文献書誌] Yoshiki Miura: "Preparation and Properties of Monoclonal Antibodies against Lipopolysaccharide-Sensitive Serine Protease Zymogen,Factor C,from Horseshoe Crab(Tachypleus tridentatus)Hemocytes." J.Biochem.112. 476-481 (1992)
• [文献書誌] Shouichi Higashi: "Tissue Factor Potentiates the Factor VIIa-catalyzed Hydrolysis of an Ester Substrate." J.Biol.Chem.267. 17990-17996 (1992)
• [文献書誌] Hitoshi Nishimura: "Human Factor X Has a Tetrasaccharide O-Glycosidically Linked to Serine-61 through the Fucose Residue." J.Biol.Chem.267. 17520-17525 (1992)
• [文献書誌] Yoshikatsu Shigematsu: "Expression of Human Soluble Tissue Factor in Yeast and Enzymatic Properties of Its Complex with Factor VIIa." J.Biol.Chem.267. 21329-21337 (1992)
• [文献書誌] Hiroyuki Takeya: "Coagulation Factor X Activating Enzyme from Russell's Viper Venom(RVV-X):A Novel Metalloproteinase with Disintegrin(platelet aggregation inhibitor)-like and C-type Lectin-like Domains." J.Biol.Chem.267. 14109-14117 (1992)
• [文献書誌] Toshiyuki Miyata: "Prothrombin Salakta:Substitution of Glutamic Acid-466 by Alanine-Reduces the Fibrinogen Clotting Activity and the Estarase Activity." Biochemistry. 31. 7457-7462 (1992)
• [文献書誌] 武谷 浩之: "「生化学」ミニレヴュー64巻.10号" 日本生化学会, 7 (1992)
• [文献書誌] 東 昌市: "Annual Review血液1992" 中外医学社, 12 (1992)