ドパミン受容体機能分子発現制御によるパーキンソン病の新しい薬物治療の開発

1993 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 04557037
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 金澤 一郎 東京大学, 医学部(医), 教授 (30110498)
• 研究分担者: 楠 進 東京大学, 医学部(医), 助手 (90195438)
• キーワード: ドパミンレセプター / ヒトゲノミックDNA / プロモーター解析 / 線条体細胞培養 / 黒質細胞培養 / 神経栄養因子

研究概要

パーキンソン病の新しい治療の原理を見出すことを目的として、ヒトドパミンセプターの遺伝子解析と黒質ニューロンの培養系を用いた神経栄養因子の解析を行なってきた。本年度は、まず当初の計画に従って、ヒトドパミンレセプター(D_<1A>)の染色体遺伝子を単離し、そのプロモーター解析を行なった。ヒトD_<1A>のcDNA塩基配列からプライマーを合成し、ヒトゲノミックDNAからPCR産物をえた。これをプローブとしてヒトゲノミックDNAライブラリー約90万個をスクリーニングし、約40個の陽性クローンを単離した。これらのファージDNAから前述のプライマーでPCR反応を行ないD_<1A>をコードするクローンを選択し、最終的にシーケンスで確認した。得られた約20kbのクローンにはD_<1A>の2個のエクソン全長が含まれ、その上流域も約10kb含まれていた。この間米国NIHからこのD_<1A>遺伝子のエンハンサー領域の報告があったので、我々としてはその転写調節機構を調べるために、EC細胞P19のレチノイン酸による神経細胞への分化誘導系を用いて、プロモーター解析を始めた。同時に、細胞導入法を用いてD_<1A>遺伝子を導入し、POU転写因子群がD_<1A>転写に影響を与える可能性についても解析を始めた。さらに我々は、大脳皮質・線条体・黒質(実際にはドパミン含有細胞を含む中脳腹吻側部のスライスの無血清・共培養に成功した。胎生(E)14日のラットから採取した場合にはドパミン細胞は遊走して中脳部から抜け出すが、E15から採取した場合には中脳内に止まって突起を線条体へ伸ばし、線条体内でも網目状の突起を張り巡らす。このことは、E14-15の間に細胞の性質が大きくかわることを意味する。なお、中脳の単独培養では突起進展も乏しく、線条体由来の液性因子、例えば神経栄養因子の存在が示唆される。

研究成果

• [文献書誌] Kondo I & Kanazawa I: "Debrosoquine hydroxylase and Parkinson's disease" Advances in Neurology. 60. 338-342 (1993)
• [文献書誌] Murata M & Kanazawa I: "Repeated L-DOPA administration reduces the ability of dopamine storage and abolishes the supersensitivity" Neuroscience Research. 16. 16-23 (1993)
• [文献書誌] Okazawa H,Nishiyama K,---Kanazawa I: "Trk immunoreactivity at neuronal dendrite & cell body" Biochemical Biophysical Research Communi.194. 683-690 (1993)
• [文献書誌] Okazawa H,Kamei M,& Kanazawa I: "Molecular cloning and expression of a novel truncated form of chicken trkC" FEBS Letters. 329. 171-177 (1993)
• [文献書誌] Yokota H,Tamura S,--Kanazawa I---: "Evidence for a new variant CYP2D6 allele CYP2D6J in a Japanese population associated with lower in vivo---" Pharmacokinetics. 3. 256-263 (1993)