| 研究課題/領域番号 |
04557101
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| 研究機関 | 東京大学 |
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研究代表者 |
嶋田 一夫 東京大学, 薬学部, 助教授 (70196476)
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| 研究分担者 |
井町 美佐子 日本ブルカー(株), 技術課長
加藤 晃一 東京大学, 薬学部, 助手 (20211849)
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| キーワード | NMR / 抗体 / 抗原認識 / タンパク・タンパク相互作用 / 動的立体構造 |
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| 研究概要 |
1.試料の調製
抗ダンシルモノクローナル抗体の抗原認識フラグメント(Fv:VH、VLの2個のドメインから構成される最小抗原認識フラグメント、Fabなど)の特定アミノ酸を ^2D、^<13>C、^<15>N、で標識を行い、NMR測定用試料とした。
2.NMR測定技術の開拓
前述の試料を用い、HMQC-HOHAHA、HMQC-NOESY、および安定同位体フィルター法を用い、ラベルアミノ酸由来のピークを連鎖帰属法および2重標識法を用いて、Fvフラグメント中に存在するアミノ酸の80%を部位特異的に帰属した。
得られた帰属に基づき、機能性ループの溶液中における主鎖の運動性を ^<15>Nの緩和時間の測定から評価したところ抗原と直接相互作用を示した、H鎖CDR3は、抗原非存在下ではいくつかのコンフォメーションを取っていることが明らかになった。
3.NMRスペクトロメーターの開発
前項目の研究を行うに際して生じた装置上の問題点を解決するために、NMRスペクトロメーターの改造を行った。特に、 ^<15>Nの緩和時間の測定では、通常の装置では使用しないような高出力RFパルスを用いるため、この測定に耐えるパワーアンプおよび検出系の開発を行った。
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