| 研究概要 |
本研究ではRhizophora stylosaとBruguiera gymnorrhizaの2樹種を材料にもちいて、カルス細胞の誘導、継代培養、および再分化をこころみた。
Rhizophora stylosaとBruguiera gymnorrhizaの健全な未熟繁殖子を殺菌し、胚をとりだし外植体として用いた。MS培地にオーキシンの2,4‐DおよびNAA、サイトカイニンのBAPおよびKinetinを組み合わせて添加した。培養は28℃のカルチャーボックスでおこなった。
Rhizophora stylosaのカルスは、kinetinと2,4‐Dを含むMS培地で2週間で発生しはじめた。Bruguiera gymnorrhizaは維管束組織付近でリング状にカルスが発生した。生成したカルスが直径約10mmの大きさに生長したところで、3-4個に分けて継代培養した。Rhizophora stylosaのカルスは、培養初期ほど生長が速かった。顕微鏡による観察で、Rhizophora stylosaのカルスには、球状の細胞と円筒状の細胞が混在していることがわかった。
増殖したカルスは再分化を試みるために、サイトカイニンだけを含む培地、オーキシンとサイトカイニンを組み合わせた培地に移植した。培養条件は28℃恒温、5700lx・12時間、暗黒下・12時間の条件下においた。2,4‐Dとkinetinを含むMS培地で培養していたカルスの頂上部分に、多数の毛状突起構造が発生したが、その後さらに増殖をつづけ、8週間後には周辺部のカルスとみわけられなくなった。
Bruguiera gymnorrhizaの三分胚軸を砂上に植え付けた実験でカルスからシュートが分化した。このことから、Bruguiera gymnorrhizaの胚軸細胞は全能性を持っていることが確認された。1-2mmに切断した胚軸断面から細胞が増殖することが確認できたので、今後、小さなBruguiera gymnorrhiza断片から植物体を得る可能性があると結論することができる。
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