哺乳類の形態形成における上皮成長因子受容体とプロトオンコジーンの役割に関する研究

1993 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 04670014
• 研究機関: 京都大学
• 研究代表者: 塩田 浩平 京都大学, 医学部, 教授 (80109529)
• 研究分担者: 石橋 誠 京都大学, 医学部, 助手 (30232341)
• キーワード: 形態形成 / 上皮成長因子受容体 / プロトオンコジーン / 口蓋形成 / 先天奇形 / 増殖 / 分化

研究概要

1.ヒト胚子組織におけるEGF受容体(EGF-R)の発現と局在
受精後3〜8週のヒト胚子を4%パラホルムアルデヒドで固定し、パラフィン包理後、連続切片を作成した。切片に抗ウサギEGF-R抗体を反応させた後、ABC(Avidin biotin-peroxidase complex)法によって免疫組織化学的染色を施し、diamino benzidine/H_2O_2反応を行って、反応生成物を光顕的に観察した。その結果、EGF-Rの局在に特徴ある組織特異性が認められ、消化管上皮、気道上皮、軟骨、腎、表皮などに特に強い反応が認められた。一般に、増殖の盛んな上皮組織に強い免疫反応が見られ、EGFが主として上皮組織の増殖と分化に関与するとする従来からの研究結果を裏づけた。
2.マウス胎児口蓋形成過程におけるEGF-Rの発現
胎齢12〜14日のマウス胎児を用い、口蓋の形成過程におけるEGF-Rの発現を上と同様の免疫組織学的方法により調べた。その結果、口蓋突起の上皮と間葉におけるEGF-Rの発現に部位及び時期特異的な変化が見られた。口蓋突起の癒合後、口腔上皮ではEGF-Rの発現が増強したが、逆に鼻腔上皮ではEGF-Rの発現が明らかに減弱した。以上の結果は、口蓋の癒合と組織分化にEGFとその受容体が密接に関与していることを示している。
3.奇形発生とEGF-R発現の関連
妊娠10〜12日の雌マウスにレチノイン酸(80〜100mg/kg)を投与すると、その胎児に口蓋裂が高率に発生する。レチノイン酸投与後、胎児口蓋上皮におけるEGF-Rの発現を免疫組織化学的に調べたところ、無処置群に比べてEGF-Rの発現が有意に増強していた。このことから、レチノイン酸は口蓋上皮におけるEGF-Rの発現の制御を乱すことによって口蓋の癒合を障害するのであろうと推定された。

研究成果

• [文献書誌] Kumoi,T.,Nishimura,Y.,Shiota,K.: "The embryologic development of human anterior nasal aperture" Acta Otolaryngologica. 113. 93-97 (1993)
• [文献書誌] Shiota,K.,Nakatsu,T.,Irie,H.: "Computerized three-dimensional reconstruction of normal and holoprosencephalic human embryos" Birth Defects:Original Article Series. 29. 253-263 (1993)
• [文献書誌] Mori,C.,Shiota,K.: "Sexing of human embryos and fetuses by fluorescent in situ hybridization to paraffin-embedded tissues" American Journal of Medical Genetics. (1994)
• [文献書誌] Mori,C.,Nalamura,N.,Okamoto,Y.,Shiota,K.: "Cytochemical identification of programmed cell death in the fusing fetal mouse palate by specific labeling of DNA fragmentation" Anatomy and Embryology. (1994)
• [文献書誌] Moore,K.L.,Persaud,TVN.,Shiota,K.: "Color Atlas of Clinical Embryology" Saunders,Philadelphia, (1994)