ドパミン受容体サブタイプに対する抗体を用いた脳内ドパミン神経系の機能形態学的解析

1993 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 04670038
• 研究機関: 京都府立医科大学
• 研究代表者: 田口 淳一 京都府立医科大学, 医学部, 助手 (50188132)
• 研究分担者: 一谷 幸男 筑波大学, 心理学系, 助教授 (80176289) ; 井端 泰彦 京都府立医科大学, 医学部, 教授 (10079684)
• キーワード: ドパミン受容体 / アフィニティーカラムクロマトグラフィー / 受容体抗体 / 細胞内情報伝達蛋白質 / プロティンキナーゼC / メタンフェタミン / 免疫組織化学 / トランスロケーション

研究概要

平成4年度に申請した研究目的の一つであるドパミン(D)受容体サブタイプの単離精製については、ゲルとの結合に利用されるアミノ基が受容体結合に必須でないD2受容体拮抗薬YM09151-2の誘導体の一つであるM-1化合物を固定化リガンドとして用いる事により可溶化分画からの受容体回収が可能である事が判明した。しかしながら得られた受容体の精製率はもう一つの申請目的の抗体作成に適用するためには低すぎる事から、今後その精製率を高めるためにゲルからの溶出方法等を検索する必要があると考えられる。一方、覚醒剤であるメタンフェタミン(MAP)は主に線条体に於けるD神経終末に作用する結果、終末からのドパミン放出を促進させ間接的にD受容体を活性化する事が明らかにされている。従って研究目的であるD受容体活性化に伴う神経細胞内情報伝達系の変化を明確にするために情報伝達蛋白質の一つであるプロテキンキナーゼC(PKC)に着目してその抗体を用いた免疫組織化学的検索を行うと、ラット腹腔内へのMAP4mg/kgの単回投与により線条体の背外側部で神経突起を伴った細胞体が明確に観察されるようになり、この変化はPKCが可溶性分画から膜分画に移動(トランスロケーション)した結果である事が明らかになった。また、MAPを反復投与しその休薬後、単回投与ではPKCの変化が惹起されなかった2mg/kgを再投与した場合常同行動の増大、即ち逆耐性が生じる事が知られているが、この逆耐性形成時に於けるPKCの変化について免疫組織化学的に検索したところ免疫反応性増大が線条体全域にわたって認められるようになった。更にこれら変化はMAPの単回投与時及び逆耐性形成時に惹起される常同行動の時間依存性変化と一致しており、D作動性神経の刺激に基づく行動変化に受容神経のD受容体活性化及びそれに伴う細胞内情報蛋白質の動態変化が関与している事が明らかになった。

研究成果

• [文献書誌] Jun-ichi Taguchi: "Alteration of protein kinase C in rat striatum following methamphetamine administration" Japanese Journal of Psychopharmacology. 13. 360 (1993)
• [文献書誌] Jun-ichi Taguchi: "Immunocytochemical detection of gamma-aminobutyric acid(GABA)_A receptor complex of cerebrum under...." Journal of Electron Microscopy. 42. 257 (1993)
• [文献書誌] 田口淳一: "ラット線条体プロテインキナーゼCのメタンフェタミン投与に伴う変化" 神経化学. 32. 264-265 (1993)
• [文献書誌] 田口淳一: "ラット脳内gamma-アミノ酪酸(GABA)_A受容体の光顕及び電顕的免疫細胞化学" 解剖学雑誌. 68. 740 (1993)
• [文献書誌] Jun-ichi Taguchi: "Alteration of protein kinase C immunoreactivity in the rat striatum following single and repeated...." Neuroscience Research. 18. S32 (1993)
• [文献書誌] Jun-ichi Taguchi: "Alteration of striatal protein kinase C and stereotyped behavior in rat following methamphetamine...." The Japanese Journal of Pharmacology. 64. 131 (1994)
• [文献書誌] Yasuhiko Ibata: "Immunohistochemical changes of GABA_A receptor complex in rat brain during aging" The Japanese Journal of Pharmacology. 64. 307 (1994)
• [文献書誌] Chihiro Yokoyama: "Autoradiographic distribution of [^3H]YM-09151-2,a high-affinity and selective antagonist ligand for..." Journal of Comparative Neurology. (in press). (1994)