血管におけるプリン作動性生理活性物質の情報伝達機構の研究

1992 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 04670045
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 多久和 陽 東京大学, 医学部(医), 客員助教授 (60171592)
• キーワード: 血管 / 平滑筋 / 内皮 / 受容体 / G蛋白 / プリン作動性 / P_1受容体 / P_2受容体

研究概要

ATP、ADPなどのアデニンヌクレオチドやアデノシンに代表されるプリン体は多面的な心血管作用を有する。このようなプリン体の多様な生理・薬理活性は複数の受容体サブタイプ及びそれに共役する異なるエフェクター系を介して発現されると考えられる。本研究では血管平滑筋及び血管内皮に存在するプリン受容体の情報伝達系を解析した。
1.培養ラット大動脈平滑筋細胞(RASM)及びヒト血管内皮細胞では、ATPに反応して[Ca^<2+>]iの顕著な増加及びイノシトールリン酸産生が見いだされた。これらの結果から上記2細胞はP2y受容体を有していることが明らかになった。しかし、ADP、ADPβSに対する反応は両細胞で異なり、P2y受容体にはさらにサブタイプの存在することが示唆された。P2y受容体のcDNAクローニングを目的として発現ベクターpCDM8を用いてRASM細胞cDNAライブラリーを作製し、ATP刺激に対するイノシトールリン酸産生を指標としてスクリーニングしたが、陽性クローンを検出できなかった。
2.PCRによりイヌA1受容体cDNAフラグメントを得、これをプローブとして肝cDNAライブラリーをスクリーニングし、A1受容体の全長をコードするcDNAをクローニングし、その塩基配列を決定した。
3.PCR産物をプローブとした大動脈平滑筋細胞cDNAライブラリーのスクリーニングにより、2種の新規のG蛋白質共益型受容体cDNAをクローニングし、塩基配列を決定した。これら2クローンのmRNAはいずれも心血管系及び、その他の平滑筋組織に主として発現していることが明らかとなった。

研究成果

• [文献書誌] Noriko Takuwa: "Ca^<2+>/calmodulin is involved in growth factor-induced retinoblastoma gene product phosphorylation in human vascular endothelial cells" FEBS Letters. 306. 173-175 (1992)
• [文献書誌] Takeshi Sakurai: "Level of ET_B receptor mRNA is down-regulated by endothelins." Biochem. Biophys. Res. Commun.186. 342-347 (1992)
• [文献書誌] Yoshitoshi Kasuya: "A pertussis toxin-sensitive mechanism of endsthelin action in porcine coronary artery smooth muscle." British Journal of Pharmacology.107. 456-462 (1992)
• [文献書誌] Yoh Takuwa: "Alterations in protein hinase C activity and membrane lipid metabolism in cerebral vasospasm after subarachnrid hemornhage." Journal of cerebral Blood Flow and Metabulism. (1993)
• [文献書誌] Hiroshi Okazaki: "Molecular cloning of a novel putatine G protein-coupled receptor expressed in the cardisvascular system" Biochem. Biophys. Res. Commun.(1993)
• [文献書誌] Takao Asano: "The cellular Membranes" S.T.Ohnishi and T.Ohnishi, 412 (1993)