1993 年度実績報告書

トキソプラズマ感染細胞による抗原提示機構の分子論的、超微形態学的解析

研究課題

研究課題/領域番号	04670229
研究機関	長崎大学
研究代表者	矢野明彦長崎大学, 医学部, 教授 (20135122)
研究分担者	大野伸一山梨医科大学, 医学部, 教授 (50109170)
キーワード	トキソプラズマ / 抗原提示 / MHCクラスI / 細胞膜融合 / 細胞内寄生体
研究概要	細胞内寄生原虫に対するワクチン開発への基本的研究を目的とし、トキソプラズマ原虫感染細胞がトキソプラズマ原虫感染細胞特異的細胞傷害性T細胞にHLA classI分子で抗原提示する機序、特に宿主細胞内におけるトキソプラズマ原虫抗原の動態について解析を行った。トキソプラズマ原虫を感染させたヒトB細胞腫を急速凍結法、凍結置換固定法、ディープエッチング法を用いた超微形態学的解析の結果、トキソプラズマ原虫外膜と宿主parasitophorous膜の融合、およびチャンネル様構造形成が起こることが明らかとなった。そこでトキソプラズマ原虫を生体pH指示剤(BCECF)で生体蛍光染色Workstation(ACAS)およびcytoflowmetry(FACScan)で解析した結果、感染後1‐2時間後にトキソプラズマ原虫由来のBCECFが宿主細胞内に移行することが示された。そこでトキソプラズマ原虫感染細胞が細胞傷害性T細胞にトキソプラズマ原虫抗原を提示する際に機能するHLA classI分子を特定するために抗HLA class I private モノクローナル抗体を用いて検討した結果、HLA‐A2がトキソプラズマ抗原提示に機能していることが示された。次にトキソプラズマ原虫感染細胞によって提示されるペプチドT細胞エピトープを解析した。トキソプラズマ原虫感染細胞を超音波で破砕後,trifluoro‐acetic acidにより抽出し、逆相高速液体クロマトグラフィーにより分画した。このペプチド分画をトキソプラズマ原虫感染細胞特異的細胞傷害性T細胞の標的細胞にpulseすることによって、エピトープの検索を行ったところfracrtion29に含まれることが分かった。fraction29に含まれるペプチドエピトープのアミノ酸解析の結果、N末端から2番目にLeu,3番目にIle、9番目にMetあるいはPheの疎水性アミノ酸を持つオリゴペプチドであることが示された。

研究成果
(8件)

すべてその他

すべて文献書誌 (8件)

[文献書誌] Akihiko Yano: "Antigen presentation by Toxoplasma‐infected cells:Antigen entry through cell membrane fusion." Int Arch Allergy Immunol,. 98. 13-17 (1992)
[文献書誌] Fumie Aosai: "Isolation of naturally processed peptides from Toxoplasma‐gondii‐infected human B lymphoma as recognized by cytotoxic T lymphocytes." J.Parasitol.(in press).
[文献書誌] Kazumi Norose: "Dominance of activated T cells and IL‐6 in aqueous humor in Vogt‐Koyanagi‐Harada disease." Investigative Ophthalmology & Visual Science. 35(1). 33-39 (1994)
[文献書誌] Keizo Yamashita: "Migration of murine epidermal Langerhans cells to reginal lymph nodes:engagement of maior histocompatibility complex class ll antigens induces migration of Langerhans cells." Microbiol.Immunol.(in press.).
[文献書誌] 青才文江: "抗原提示細胞とリンパ球の活性化" 検査と技術. 20(7). 534-535 (1992)
[文献書誌] 橋口純一郎: "腹腔内リンパ節に寄生し,好酸球増多を認めたアニサキス症の一例." 長崎医学会雑誌. 67(4). 258-260 (1993)
[文献書誌] 矢野明彦: "マクロファージ実験マニュアル抗原提示" 徳永徹、吉田彪、赤川清子編講談社, (1992)
[文献書誌] 倉田明彦: "免疫学update-臨床医のために HKA分子と免疫応答" 矢田純一編中外医学社, (1993)

1993 年度 実績報告書

トキソプラズマ感染細胞による抗原提示機構の分子論的、超微形態学的解析

研究代表者

矢野 明彦 長崎大学, 医学部, 教授 (20135122)

研究成果

[文献書誌] Akihiko Yano: "Antigen presentation by Toxoplasma‐infected cells:Antigen entry through cell membrane fusion." Int Arch Allergy Immunol,. 98. 13-17 (1992)

[文献書誌] Fumie Aosai: "Isolation of naturally processed peptides from Toxoplasma‐gondii‐infected human B lymphoma as recognized by cytotoxic T lymphocytes." J.Parasitol.(in press).

[文献書誌] Kazumi Norose: "Dominance of activated T cells and IL‐6 in aqueous humor in Vogt‐Koyanagi‐Harada disease." Investigative Ophthalmology & Visual Science. 35(1). 33-39 (1994)

[文献書誌] Keizo Yamashita: "Migration of murine epidermal Langerhans cells to reginal lymph nodes:engagement of maior histocompatibility complex class ll antigens induces migration of Langerhans cells." Microbiol.Immunol.(in press.).

[文献書誌] 青才文江: "抗原提示細胞とリンパ球の活性化" 検査と技術. 20(7). 534-535 (1992)

[文献書誌] 橋口純一郎: "腹腔内リンパ節に寄生し,好酸球増多を認めたアニサキス症の一例." 長崎医学会雑誌. 67(4). 258-260 (1993)

[文献書誌] 矢野明彦: "マクロファージ実験マニュアル 抗原提示" 徳永徹、吉田彪、赤川清子編 講談社, (1992)

[文献書誌] 倉田明彦: "免疫学update-臨床医のために HKA分子と免疫応答" 矢田純一編 中外医学社, (1993)

1993 年度実績報告書

矢野明彦長崎大学, 医学部, 教授 (20135122)

[文献書誌] 矢野明彦: "マクロファージ実験マニュアル抗原提示" 徳永徹、吉田彪、赤川清子編講談社, (1992)

[文献書誌] 倉田明彦: "免疫学update-臨床医のために HKA分子と免疫応答" 矢田純一編中外医学社, (1993)